磁性納米四氧化三鐵顆粒對小鼠免疫功能影響的初步研究.pdf

1、目的：磁性納米四氧化三鐵（magnetic Fe3O4 nanoparticles，F(xiàn)e3O4-MNPs）是一種性能穩(wěn)定、無毒、磁性強、制備相對簡單而且生物相容性較好的磁性材料，體內(nèi)外及臨床實驗均提示Fe3O4-MNPs對機體無明顯毒性，有較好的生物相容性。本課題旨在研究比較不同濃度的Fe3O4-MNPs能否對正常小鼠的免疫功能產(chǎn)生影響，為Fe3O4-MNPs作藥物載體臨床免疫應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法在一次性經(jīng)小鼠尾靜脈給

2、藥72小時后及灌胃14天后處死小鼠進行檢測。（1）分別稱取小鼠的脾臟和體重，計算脾臟系數(shù)，明確Fe3O4-MNPs對免疫器官的影響。（2）采用甲基四唑藍法（MTT）法檢測刀豆球蛋白（ConA）誘導下小鼠脾淋巴細胞增殖情況，了解不同濃度尾Fe3O4-MNPs對免疫細胞增殖的作用。（3）采用中性紅比色法（NaturalRed assay，NR）檢測小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能，測定巨噬細胞活性明確Fe3O4-MNPs對非特異性免疫的作用。（4）

3、通過流式細胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）檢測小鼠外周血CD3+CD4+，CD3+CD8+細胞比例，分析Fe3O4-MNPs對小鼠T細胞亞群分化是否發(fā)生影響，有無影響到CD4+/CD8+比例。（5）使用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbentassay，ELISA）檢測小鼠外周血與輔助T細胞（T helper cell，Th）分泌相關(guān)的細胞因子白細胞介素-2（Interleukin-2，IL-2

4、）、IL-4、IL-10和γ干擾素（interferon-γ，IFN-γ），了解Fe3O4-MNPs在細胞因子分泌方面的作用。
　　 結(jié)果（1）經(jīng)尾靜脈及灌胃給藥后各Fe3O4-MNPs組小鼠的脾臟質(zhì)量及脾臟/質(zhì)量比與生理鹽水對照組相比并未表現(xiàn)出明顯的差異（p>0.05）。（2）尾靜脈給藥組在5.14m/kgFe3O4-MNPs給藥情況下對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞增殖有明顯的促進作用（p<0.05），但在高濃度51.4mg/

5、kgFe3O4-MNPs會導致抑制。灌胃給藥時300mg/kg，600mg/kg和1200mg/kg各組均表現(xiàn)出對淋巴細胞增殖的促進作用，且以中劑量組作用最為顯著（p<0.05）。（3）經(jīng)灌胃給藥時，600mg/kgFe3O4-MNPs時小鼠腹腔巨噬細胞的活力明顯強于其他兩個給藥組（p<0.05）。（4）流式檢測T淋巴細胞亞群時，與對照組相比，各濃度組的Fe3O4-MNPs均可以提高小鼠正常機體的CD4+細胞百分率（p<0.05），且隨

6、著Fe3O4-MNPs濃度的升高，F(xiàn)e3O4-MNPs對CD8+細胞逐漸表現(xiàn)出抑制。（4）ELISA檢測結(jié)果顯示，在5.14mg/kgFe3O4-MNPs給藥組IL-2、IL-10和。IFN-γ的分泌均較對照組不同程度增高（p<0.05），但IL-4的分泌未表現(xiàn)出明顯的統(tǒng)計學差異。
　　 結(jié)論（1）不同濃度的Fe3O4-MNPs對機體的免疫系統(tǒng)均有一定影響，隨著濃度和給藥方式的不同，表現(xiàn)不同。（2）適當濃度Fe3O4-MNPs對

7、ConA刺激的脾淋巴細胞具有活化作用。（3）Fe3O4-MNPs對機體非特異性免疫功能的調(diào)節(jié)作用可能是通過增強巨噬細胞活性來產(chǎn)生的。（4）各濃度組的Fe3O4-MNPs均可以提高小鼠正常機體的CD4+細胞百分率，且隨著Fe3O4-MNPs濃度的升高，F(xiàn)e3O4-MNPs對CD8+細胞逐漸表現(xiàn)出抑制。提示Fe3O4-MNPs可增強機體的免疫應(yīng)答反應(yīng)。（5）Fe3O4-MNPs可以對小鼠細胞因子IFN-γ，IL-2，IL-10的分泌產(chǎn)生影響