功能矯治大鼠下頜前伸后髁突軟骨iNOS表達(dá)的動態(tài)實驗研究.pdf

1、目的:功能矯治的最終效果一直是正畸工作者關(guān)注的重點之一,由于實驗方法、設(shè)計思路以及患者的配合程度的不同,其結(jié)果也不盡相同。學(xué)術(shù)界對其存在兩種不同的觀點,一部分學(xué)者認(rèn)為功能矯治通過前伸下頜使肌肉應(yīng)力發(fā)生改變,從而促進髁突的改建,影響整個下頜骨的生長發(fā)育進而改善Ⅱ類錯(牙合)的面型;另有部分學(xué)者認(rèn)為功能矯治只是提前預(yù)支了下頜的最大生長量,最終不會產(chǎn)生明顯的骨骼作用。正常軟骨細(xì)胞能合成少量的NO,一定的力學(xué)刺激對軟骨細(xì)胞NO的生成有影響,而i

2、NOS是合成NO的主要影響因素之一。因此,本實驗通過研究功能矯治過程中大鼠髁突軟骨iNOS的表達(dá)變化,初步了解iNOS及NO在髁突改建過程中的作用同時通過iNOS的動態(tài)變化對功能矯治的穩(wěn)定性進行遠(yuǎn)期的觀察,旨在為臨床工作提供實驗依據(jù)。
　　 方法:選擇60只4周齡健康Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,體重90g左右,常規(guī)顆粒飼料喂養(yǎng)7天后隨機等量分為兩組:實驗組(S)和對照組(D),各30只。實驗組大鼠白天配戴自制的

3、可摘式上頜斜面導(dǎo)板矯治器10-12小時引導(dǎo)下頜向前。對照組大鼠不戴矯治器,為自然生長組。所有大鼠均自由飲水。實驗組大鼠自由飲食,對照組大鼠定時喂食,以保證兩組動物體重增加量相當(dāng)。實驗周期分別為1周(1w)、2周(2w)、3周(3w)、4周(4w)、5周(5w)、6周(6w),按實驗周期每組隨機抽取大鼠5只斷頸處死,取右側(cè)髁突置于4％多聚甲醛中4℃固定24小時,蒸餾水沖洗后室溫下用10％的EDTA脫鈣,常規(guī)處理后石蠟包埋,髁突組織塊縱向切

4、片。石蠟切片經(jīng)HE染色后觀察髁突軟骨的組織學(xué)變化并測量不同實驗周期髁突軟骨的厚度;通過免疫組化染色應(yīng)用Motic Med6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)(Motic Med6.0CMIAS)檢測不同實驗周期髁突軟骨不同部位iNOS的表達(dá)變化。
　　 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對所有數(shù)據(jù)進行處理,從而分析不同時間周期髁突軟骨厚度的變化以及iNOS在髁突軟骨中表達(dá)強度的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1組織學(xué)觀察
　　

5、 肉眼觀察:大鼠髁突前后徑大于內(nèi)外徑,髁突的前斜面較長,后斜面偏短。
　　 1.1對照組髁突軟骨的組織學(xué)特點
　　 鏡下可見一層纖維組織即關(guān)節(jié)盤包繞在髁突軟骨表面,對應(yīng)于關(guān)節(jié)盤后帶略靠后部位的軟骨組織最厚,髁突軟骨由后向前逐漸變薄。髁突軟骨下方為骨小梁。伴隨著生長發(fā)育髁突軟骨的整體厚度逐漸變薄,出現(xiàn)增齡性變化。
　　 髁突軟骨具有獨特的層域化分帶,根據(jù)細(xì)胞形態(tài)不同可分為:①纖維層為含有成纖維細(xì)胞的致密的纖維組織

6、構(gòu)成②生發(fā)層有許多致密的小細(xì)胞組成,此層細(xì)胞比較活躍,可見有絲分裂相③成熟層此層細(xì)胞增大,形態(tài)不規(guī)則,排列不整齊,胞核多為于細(xì)胞的一側(cè),軟骨機制增多。④移行層此層細(xì)胞腫脹,胞核不明顯,軟骨基質(zhì)明顯增多,是軟骨細(xì)胞逐漸向骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化的區(qū)域。
　　 1.2實驗組髁突軟骨的組織學(xué)特點
　　 功能矯治前伸大鼠下頜后髁突軟骨中后部的厚度增加,從實驗的第2周開始髁突軟骨的中部和后部與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異,軟骨層增厚表現(xiàn)為生發(fā)層細(xì)胞數(shù)

7、增加,胞核大而明顯;成熟層較對照組也增厚,細(xì)胞形態(tài)與對照組相似。髁突軟骨前部的厚度從第1周到第5周與對照組相比沒有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異,在第6周軟骨前部厚度與對照組相比變薄有明顯的統(tǒng)計學(xué)意義。觀察動物發(fā)現(xiàn)戴用矯治器一段時間后拆除矯治器,個別大鼠下頜習(xí)慣性前伸,出現(xiàn)前牙的反(牙合)。
　　 2免疫組化結(jié)果
　　 iNOS陽性表達(dá)為棕黃色,主要定位于胞漿。陽性細(xì)胞著色水平明顯高于背景水平,空白對照(PBS代替一抗)組未見陽性著色

8、顆粒。iNOS在大鼠髁突軟骨的全層均有表達(dá),以成熟層淺層的軟骨細(xì)胞表達(dá)最強。iNOS的表達(dá)強度在髁突軟骨后部最強,其次為前部,中部表達(dá)最弱。
　　 2.1髁突軟骨前部iNOS的表達(dá)
　　 對照組和實驗組前部的表達(dá)趨勢同后部相同,從第2周到第4周iNOS表達(dá)的兩兩比較有顯著性差異。前伸大鼠下頜后前部表達(dá)水平也增強,從第1到第6周與對照組相比始終有顯著性差異。
　　 2.2髁突軟骨中部iNOS的表達(dá)
　　 對

9、照組和實驗組中部的表達(dá)趨勢也同后部相同。對照組從第2到第4周iNOS表達(dá)的兩兩比較有顯著性差異。前伸大鼠下頜后iNOS的表達(dá)在第1周,第2周時與對照組有顯著性差異,第3周到第4周與對照組相比無顯著性差異。
　　 2.3髁突軟骨后部iNOS的表達(dá)
　　 對照組中iNOS的陽性表達(dá)強度逐漸降低,呈現(xiàn)出增齡性變化,從第2周到第5周iNOS表達(dá)的兩兩比較有統(tǒng)計學(xué)意義;實驗組中iNOS的表達(dá)水平均高于對照組,其表達(dá)趨勢與對照組相同

10、,從第1到第5周iNOS表達(dá)與對照組相比有顯著性差異。實驗第6周iNOS的表達(dá)水平與對照組相比無顯著性差異。
　　 結(jié)論:
　　 1生長期大鼠髁突軟骨隨觀測時間的推移出現(xiàn)增齡性變化,軟骨厚度逐漸變薄;功能矯治后髁突軟骨表現(xiàn)為適應(yīng)性改建,治療初期軟骨厚度明顯增厚并隨實驗進程逐漸變薄。
　　 2正常生理狀態(tài)下生長發(fā)育期大鼠髁突軟骨中有iNOS的表達(dá),隨生長發(fā)育逐漸降低,提示iNOS參與髁突正常的生長發(fā)育過程。