胰島素控制下糖尿病大鼠功能性下頜前伸后髁突軟骨的變化.pdf

1、目的：通過動物實驗研究探，討胰島素控制下糖尿病大鼠功能性下頜前伸對顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨改建的影響，為尋求臨床上能否為糖尿病患者進行正畸功能矯治提供科學的實驗依據(jù)與理論基礎(chǔ)。 方法：1 選擇體重50～60g的雄性3周齡SD大鼠120只，隨機分為三組，每組40只，即正常對照組(A組)，糖尿病組(B組)，胰島素治療組(C組)；每組再隨機分為五小組，每小組8只，即0天、7天、14天、21天、30天組。B組、C組大鼠按85mg/Kg體重腹腔

2、注射鏈脲佐菌素(STZ)制備1型糖尿病模型，A組給予同等劑量的檸檬酸緩沖液腹腔注射。于注射72小時后尾靜脈取血，留取尿液標本，分別測定血糖、尿糖，以血糖>16.8mmol/L，尿糖(+++～++++)，確定為糖尿病大鼠。從造模成功后第四天開始，C組給予胰島素頸背部皮下注射0～4U/天以控制血糖，根據(jù)血糖尿糖情況調(diào)整用量，使隨機血糖范圍為8-10mmol/L。A組、B組給予同等劑量的生理鹽水注射。糖尿病模型成模10天后各組大鼠上裝置，以3

3、％戊巴比妥鈉腹腔注射全麻下，上中切牙粘固矯治器。矯治器由上切牙冠套和斜面導(dǎo)板組成，斜面導(dǎo)板向舌側(cè)傾斜，與頜平面成25°角，就位粘固后，下切牙恰位于斜面導(dǎo)板唇面，且咬合時滑行至對刃或反頜關(guān)系，引導(dǎo)下頜前伸磨牙無咬合。所有大鼠均自由飲水和攝食，飼料為河北醫(yī)科大學實驗動物中心配制的全價顆粒飼料，戴用矯治器后進食清水泡軟的飼料。矯治器24小時戴用，戴用期間嚴密監(jiān)控大鼠的矯治器，如有損壞和脫落，及時戴用新矯治器。 2 血糖測定：B、C組實驗過程中

4、每天測定一次血糖，連續(xù)三次血糖不達標的大鼠被剔除。處死前再次取血測定血糖，B組血糖＞16.8mmol/L，C組血糖＜10mmol/L的大鼠作為實驗結(jié)果測定對象。 3.髁突組織切片制備：分別于粘固矯治器后0天、7天、14天、21天、30天將各小組血糖達標的大鼠全麻下心臟放血處死。分別取雙側(cè)髁突，經(jīng)4％多聚甲醛4℃固定72小時后，用7％EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)脫鈣三周后，常規(guī)脫水，包埋，經(jīng)髁突正中矢狀面作矢狀連續(xù)切片，厚約6μm

5、。經(jīng)常規(guī)HE染色和膠原及酸性粘多糖組織化學染色，觀察大鼠功能矯治后髁突軟骨改建情況。應(yīng)用免疫組織化學方法探測TGF-β1和VEGF在髁突軟骨中的含量及分布變化情況。 結(jié)果：1 HE染色切片觀察：A、B和C組髁突軟骨后份軟骨厚度均增加。A組軟骨厚度與C組無明顯差別，A、C組軟骨厚度大于B組。其中增殖層面積增加最明顯，肥大層和鈣化軟骨層也有不同程度的增加，纖維層無明顯改變。厚度在增殖層最早發(fā)生變化。各層軟骨厚度的變化以實驗二周和三周

6、最為明顯。 A、B和C組髁突軟骨前份軟骨厚度均減小。A組軟骨厚度與C組無明顯差別，B組軟骨厚度明顯小于A、C組。增殖層最早發(fā)生變化，但厚度變化集中在肥大層和鈣化軟骨層，面積明顯減少，增殖層減少幅度弱于肥大層和鈣化軟骨層，纖維層無明顯改變。各組軟骨厚度以實驗第三周和第四周變化最為明顯。 2 膠原染色結(jié)果觀察：A組、B組和C組髁突軟骨各層均有膠原藍綠色染色，并且在纖維層、肥大層的染色最深。0天、1周、2周時膠原染色有逐漸減弱趨勢，各

7、組間無顯著差異。A組、C組3周時增殖層，肥大層和鈣化軟骨層膠原染色變淺為淡綠色，A、C組間染色強度無明顯差異；B組3周時各軟骨層膠原染色強度較A，C組減弱更明顯。4周時A組肥大層和鈣化軟骨層膠原染色有加深趨勢。C組肥大層膠原染色有加深趨勢，其余各層無明顯變化。B組各層染色無加深趨勢，較3周時無明顯變化。 3.酸性粘多糖染色結(jié)果觀察：A組、B組和C組酸性粘多糖染色主要見于基質(zhì)中，呈藍色，較多集中在肥大層。由增殖層到鈣化軟骨層基質(zhì)陽

8、性反應(yīng)逐漸增強，骨小梁亦呈陽性反應(yīng)。0天、1周、2周時染色呈減弱趨勢，各組間無顯著差異。3周時A組，C組增殖層、肥大層和鈣化軟骨層染色變淡，分布不均，藍染區(qū)域減少。A、C組間無顯著差異。B組各層軟骨染色強度弱于A、C組。4周時A組增殖層、肥大層染色有輕度加深。C組肥大層染色有增加趨勢。A、C組無顯著差異。B組未呈現(xiàn)加深趨勢，與3周時相似。 4 TGF-β1染色結(jié)果觀察：A組、B組和C組大鼠各層髁突軟骨細胞都有TGF-β1的免疫染

9、色。各組均為肥大層陽性最強。其次是增殖層和鈣化軟骨層。A組各層染色從1周起逐漸增強，3周時染色最強，4周出現(xiàn)回落趨勢。B組各層染色從1周起呈增強趨勢，增加較平穩(wěn)，未見回落，但染色強度低于A組，差異有明顯統(tǒng)計學意義(P<0.01)。C組各層染色從2周起明顯增強，4周時有輕度減弱。A，C組各層染色強度無明顯差異。 5 VEGF染色結(jié)果觀察：A組、B組和C組大鼠髁突軟骨細胞纖維層沒有VEGF表達。增殖層表達較弱，從增殖層到肥大層的上1/3表達

10、逐漸增強，肥大層的中1/3有高表達，下1/3表達開始減弱，鈣化軟骨層的表達較弱或沒有表達。A組各層VEGF染色從2周起逐漸增強，3周時最高，4周出現(xiàn)下降趨勢。B組各層染色從2周起呈增強趨勢，未見回落，染色強度低于A組；差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C組各層染色從3周起明顯增強，染色強度低于A組，但高于B組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 結(jié)論：1 本實驗條件下，糖尿病大鼠髁突軟骨前份出現(xiàn)了明顯組織細胞萎縮消失，前后份軟骨