c-fos介導(dǎo)下頜功能前伸后髁突骨改建的研究.pdf

1、目的:髁突軟骨在整個生命過程中始終處于改建狀態(tài)，改建除了受到機體自身遺傳、體液、神經(jīng)等因素控制之外，其局部所受的各種應(yīng)力刺激也起著重要作用。髁突軟骨細胞能夠感受各種應(yīng)力刺激，在生物機械力的作用下，髁突軟骨內(nèi)會產(chǎn)生生物力學(xué)信號的轉(zhuǎn)換，表現(xiàn)出細胞增殖、分化和程序性細胞死亡等一系列的反應(yīng)。然而，髁突軟骨受到機械應(yīng)力作用后，體內(nèi)軟骨細胞如何應(yīng)答機械應(yīng)力刺激，并將刺激信號轉(zhuǎn)導(dǎo)進入細胞內(nèi)，從而調(diào)節(jié)髁突骨改建的細胞機制仍未能得到清楚的認識。近年來發(fā)現(xiàn)

2、c-fos基因參與髁突骨改建的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和調(diào)控過程，并受到學(xué)者的關(guān)注。c-fos屬于細胞癌基因中的核內(nèi)蛋白類，集中分布于細胞核內(nèi)，細胞處于靜止期時不表達，它的表達一般與細胞生長、增殖同步出現(xiàn)。原癌基因的主要功能是調(diào)節(jié)細胞生長、增殖和分化，有研究發(fā)現(xiàn)該基因與軟骨細胞增殖以及骨形成有著密切的關(guān)系。
　　本實驗采用免疫組織化學(xué)染色的方法檢測大鼠下頜功能前伸后髁突軟骨中c-fos的表達及其變化規(guī)律，探討細胞內(nèi)c-fos介導(dǎo)功能矯治前伸下頜后

3、髁突骨改建的機制，為臨床上功能矯治提供實驗依據(jù)。
　　方法:選用4周齡健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠70只，體重約80克，隨機等量分為實驗組和對照組，組內(nèi)根據(jù)實驗周期(1、3、7、14、21、28和35天)分為7組（每組5只），共14組。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，實驗組利用3M玻璃離子將自制下頜前伸斜面導(dǎo)板矯治器粘固于大鼠上切牙，通過鏈狀橡皮圈經(jīng)鼻上頜復(fù)合與兩側(cè)口外弓連接，使得斜面導(dǎo)板獲得穩(wěn)定的固位，將大鼠四肢用醫(yī)用橡皮

4、膏緊緊包裹有效地防止大鼠前爪對裝置的破壞及對面部組織的傷害，矯治器24h戴用;對照組不做任何實驗操作。所有動物均以軟食飼養(yǎng)，自由飲水，同環(huán)境下飼養(yǎng)至實驗結(jié)束。實驗后1、3、7、14、21、28、35天分別取材，常規(guī)固定，脫鈣，脫水，包埋。石蠟切片后進行常規(guī)HE染色觀察髁突組織學(xué)變化;免疫組化方法（二步法）檢測FOS蛋白的表達，采用ZKPACS-G型中科恒業(yè)細胞圖象分析系統(tǒng)進行免疫組化染色評分，以IHS值表示染色強度。所有數(shù)據(jù)結(jié)果均應(yīng)用S

5、PSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理，統(tǒng)計分析時實驗組與對照組組間比較采用t檢驗，組內(nèi)比較采用單因素方差分析，以P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。檢驗水準α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1大體觀察
　　實驗組大鼠下頜處于適度前伸狀態(tài)，上下頜前牙呈對刃關(guān)系，摘除矯治器后，下頜不能后退。而對照組大鼠前牙覆蓋約3mm。
　　2髁突形態(tài)學(xué)變化
　　對照組隨著觀測時間的延長，髁突軟骨呈現(xiàn)增齡性變化，表現(xiàn)為軟骨厚度變薄，其中軟骨中

6、部和后部變化更為顯著;實驗組自實驗第3天起，髁突軟骨各層組織變厚，軟骨細胞數(shù)量增多，髁突中后份有明顯變化，而前份變化不明顯。之后到21天時，軟骨軟骨各層逐漸穩(wěn)定，移行層較對照組仍明顯增厚，并可見處于末期的軟骨細胞，成骨細胞以及大量原始骨小梁及發(fā)育不全的骨髓腔。
　　3 FOS蛋白表達水平及分布
　　空白對照(PBS代替一抗)組未見陽性著色顆粒。對照組髁突軟骨中僅肥大層少量細胞FOS蛋白表達陽性，且一直到第21天都維持在較低的

7、表達水平，第21天以后表達逐漸下降到極低的水平，組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);實驗組第3天時，髁突軟骨中FOS蛋白表達明顯增強，IHS=2.2±1.10，與對照組IHS=1.0±0.70顯著差異(P＞0.05)，第7天時，實驗組IHS=6.0±1.22陽性表達持續(xù)增強，與對照組IHS=1.0±0.70比較有明顯差異(P＜0.05);第14天，實驗組IHS=6.0±1.58，與第7天基本維持在同一表達水平，第21天，實驗組IH

8、S=3.6±1.67，大部分樣本陽性表達細胞開始減少，但與對照組相比仍有顯著差異(P＜0.05);第28天，實驗組IHS=2.4±1.14，對照組IHS=0.8±0.45，差別仍具有統(tǒng)計學(xué)意義;第35天，髁突軟骨FOS蛋白表達回落至極低水平，實驗組IHS=0.6±0.55，與對照組IHS=0.6±0.55相比無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)論:
　　1 c-fos參與了大鼠下頜前伸后髁突軟骨改建過程的調(diào)節(jié)。
　　2 c-fos在