生長(zhǎng)期大鼠下頜前伸后髁突鈣磷元素的動(dòng)態(tài)能譜分析.pdf

1、目的:應(yīng)用X射線能譜分析儀從微觀上分析功能矯治前伸大鼠下頜后髁突前、中、后部鈣磷元素的代謝情況及在保持過(guò)程中的改變,從而以Ca/P的動(dòng)態(tài)變化評(píng)價(jià)功能矯治過(guò)程中的骨改建情況,通過(guò)檢測(cè)全過(guò)程的鈣磷能譜變化評(píng)價(jià)Ⅱ類(牙合)功能矯治的遠(yuǎn)期效果,為臨床提供相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　 方法:選取健康的5周齡雄性SD大鼠35只(清潔級(jí)),體重約90-100g,由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。經(jīng)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)7天,待大鼠適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境后隨機(jī)分為:對(duì)照

2、組(2周組,4周組,6周組);實(shí)驗(yàn)組(戴用矯治器2周組,戴用矯治器4周組,戴用矯治器2周后摘除并觀察2周組,戴用矯治器6周組)。每組5只,自由攝食飲水。實(shí)驗(yàn)組大鼠配戴自制的上頜可摘式斜面導(dǎo)板矯治器引導(dǎo)下頜前伸,每日戴用時(shí)間為10-12小時(shí);對(duì)照組不做任何處理,為自然生長(zhǎng)組。大鼠斷頸處死后取雙側(cè)髁突,其中右側(cè)髁突于4％多聚甲醛中固定,10％EDTA脫鈣,逐級(jí)酒精脫水后常規(guī)石蠟包埋,沿髁突矢狀切片,厚約5μm,取中間部位的切片,進(jìn)行組織切片

3、制備,HE染色后光鏡下觀察其形態(tài),并在10倍鏡下應(yīng)用vista病理圖像分析軟件采圖,測(cè)量髁突前、中、后部軟骨厚度;左側(cè)髁突于2.5％戊二醛中固定24小時(shí)以上,液氮制冷條件下沿矢狀方向劈開髁突,暴露觀察面。樣本經(jīng)0.1mol/LPBS反復(fù)沖洗,再置于0.1mol/LPBS液中超聲清洗5分鐘,梯度酒精逐級(jí)脫水,乙醚置換酒精,干燥后使用導(dǎo)電膠粘于觀測(cè)臺(tái),在掃描電鏡定位下分別對(duì)髁突前、中、后斜面做X射線能譜分析及元素定量測(cè)定。將全部記測(cè)數(shù)值按順

4、序輸入計(jì)算機(jī)同時(shí)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。使用t檢驗(yàn)比較各組特征數(shù)值,分析各組數(shù)據(jù)之間的差異。
　　 結(jié)果:
　　 1 HE染色后光鏡下觀察髁突軟骨層變化:
　　 1.1髁突軟骨層形態(tài)學(xué)變化
　　 軟骨細(xì)胞根據(jù)形態(tài)可將其分為:①纖維層:由平行于髁突表面的膠原纖維構(gòu)成,含有纖維細(xì)胞;②生發(fā)層:細(xì)胞體積小,呈圓形或卵圓形,排列緊密,核大,胞外基質(zhì)少;③成熟層:細(xì)胞體積明顯增大,卵圓

5、形,軟骨基質(zhì)明顯增多,細(xì)胞排列不規(guī)律;④移行層:細(xì)胞腫脹,較成熟層明顯增大。胞核固縮或腫脹,細(xì)胞外軟骨基質(zhì)增多、均勻。軟骨層移行并無(wú)確切分界,其下方為骨小梁與軟骨表面垂直排列。髁突軟骨由后向前逐漸變薄,以成熟層、移行層的變化最為明顯。對(duì)照組大鼠在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中可以觀察到髁突軟骨出現(xiàn)增齡性變化,整個(gè)軟骨層逐漸變薄,以中后部變化最為明顯。細(xì)胞體積變小,骨小梁變粗。
　　 1.2髁突軟骨層厚度變化
　　 1.2.1前部軟骨:戴

6、用矯治器2周后其厚度與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05),直到戴用6周后軟骨層較對(duì)照組變薄(P＜0.05),放棄保持的2+2周組大鼠髁突前部軟骨較4周組變厚(P＜0.05),與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 1.2.2中部軟骨:戴用矯治器2周后較對(duì)照組變厚(P＜0.05),放棄保持的2+2周組與4周組相比其變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 1.2.3后部軟骨:后部軟骨層厚度變化較大與對(duì)照組相比

7、變厚(P＜0.01),放棄保持的2+2周組其后部軟骨層與4周組相比變薄(P＜0.01),但與對(duì)照組相比仍然存在差異(P＜0.01)。
　　 2髁突鈣磷能譜變化:
　　 2.1前部:
　　 戴用矯治器2周后,Ca元素峰值強(qiáng)度較低,而P含量相對(duì)升高,實(shí)驗(yàn)組Ca/P較對(duì)照組低(P＜0.01);
　　 戴用矯治器4周時(shí),能譜分析顯示Ca峰值強(qiáng)度略有升高,變化不明顯,而P元素相對(duì)降低,實(shí)驗(yàn)組Ca/P有所升高但低于對(duì)

8、照組(P＜0.05);
　　 6周時(shí),Ca元素含量進(jìn)一步升高,與P含量差距變大,實(shí)驗(yàn)組Ca/P繼續(xù)升高,但仍然與對(duì)照組的Ca/P存在差距(P＜0.05);
　　 放棄保持的2+2周組與一直戴用矯治器的4周組相比,前部軟骨P含量相對(duì)升高,Ca/P降低(P＜0.05)。
　　 2.2中部:
　　 Ca、P元素總體變化趨勢(shì)和前部相似,在戴用矯治器2周后Ca/P明顯降低(P＜0.05);
　　 戴用4周后

9、Ca/P與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);
　　 放棄保持的2+2周組與一直戴用矯治器的4周組相比Ca/P略有降低(P＜0.05)。
　　 2.3后部:
　　 戴用矯治器2周后,Ca元素峰值強(qiáng)度較低,而P含量相對(duì)升高,實(shí)驗(yàn)組Ca/P較對(duì)照組低(P＜0.01);
　　 戴用矯治器4周時(shí),Ca峰值強(qiáng)度升高,P元素相對(duì)降低,實(shí)驗(yàn)組Ca/P雖有所上升,但仍然比對(duì)照組低(P＜0.05);
　　 6周

10、時(shí),Ca元素含量進(jìn)一步升高,此時(shí)實(shí)驗(yàn)組雖然比對(duì)照組的Ca/P低但是已無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);
　　 放棄保持的2+2周組與一直戴用矯治器的4周組相比,Ca/P降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1功能矯治2周時(shí)大鼠髁突軟骨層細(xì)胞增生活躍,中后部軟骨層厚度明顯增大,前部厚度于矯治6周時(shí)變薄。治療后放棄保持則出現(xiàn)明顯復(fù)發(fā),前、后部變化較顯著。
　　 2對(duì)照組大鼠髁突骨礦化程度(Ca/P)在整個(gè)實(shí)