咬合創(chuàng)傷對大鼠顳下頜關(guān)節(jié)髁突軟骨及軟骨下骨改建的影響.pdf

1、實驗目的:
　　通過建立大鼠咬合創(chuàng)傷模型，觀察咬合創(chuàng)傷刺激因素去除前后大鼠顳下頜關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)髁突軟骨及軟骨下骨的組織學變化，以探討咬合創(chuàng)傷刺激因素去除前后髁突軟骨及軟骨下骨的改建變化過程，為探索咬合創(chuàng)傷相應(yīng)的臨床治療提供理論依據(jù)。
　　實驗方法:
　　選取45只8周齡雄性Wistar大鼠（體重180g-220g），隨機分為、咬合創(chuàng)傷組（實驗A組）、去除咬合創(chuàng)傷后休息2周組（實驗B組）和對照組（C組），每組15只。采用（牙合

2、）面高度為1.0mm鑄造鈷鉻合金3/4冠，粘結(jié)固定于大鼠右側(cè)下頜第一磨牙建立大鼠的咬合創(chuàng)傷模型。實驗A組分別于戴冠后1周、2周、4周三個時間點處死，分組為A1組、A2組、A3組，每組5只;實驗B組分別于戴冠1周、2周、4周后拆冠，并分別于拆冠休息2周后三個時間點處死，分組為B1組、B2組、B3組，每組5只;對照組:不作任何處理，同環(huán)境飼養(yǎng)，于相應(yīng)周數(shù)即1周、2周、3周、4周、6周五個時間點處死，分組為C1組、C2組、C3組、C4組、C5

3、組、C6組，每組3只。
　　在各實驗點，通過心臟灌注處死大鼠，取大鼠右側(cè)顳下頜關(guān)節(jié)作為標本，經(jīng)石蠟包埋后制備5μm的正中矢狀位連續(xù)切片。作HE染色和馬松三色染色行咬合創(chuàng)傷下顳下頜關(guān)節(jié)改建的形態(tài)學觀察;通過堿性磷酸酶(ALP)免疫組織化學染色觀察成骨細胞數(shù)量、分布和細胞活性;通過抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和組織蛋白酶K(CK)免疫組織化學染色觀察破骨細胞數(shù)量、分布及活性。使用Image Pro Plus6.0軟件計算CK、A

4、LP免疫組化染色的平均光密度值并對隨機視野內(nèi)TRAP陽性細胞計數(shù)。
　　統(tǒng)計分析:通過Graphpad Prism6.0統(tǒng)計軟件進行相應(yīng)的數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，組間對比通過單因素方差分析和非配對t檢驗，判斷有無統(tǒng)計學差異。當p＜0.05時，認為差異有統(tǒng)計學意義。
　　實驗結(jié)果:
　　(1)大鼠咬合創(chuàng)傷動物模型的建立:
　　鑄造冠穩(wěn)定性良好，能夠?qū)istar大鼠牙周組織造成明顯的病理性損傷，成功建立咬合創(chuàng)傷模型，實驗組大

5、鼠與對照組相比性情急躁，飲食減少。
　　(2) HE染色觀察:
　　對照組:各層細胞排列整齊，界限清晰，隨著實驗時間的延長，髁突軟骨呈現(xiàn)增齡性變化，表現(xiàn)為軟骨厚度逐漸變薄，軟骨厚度與大鼠周齡成負相關(guān)。
　　實驗組:實驗A組中A1組，A2組，A3組大鼠的髁突軟骨厚度與同齡對照組均有明顯變薄(P＜0.05)，出現(xiàn)明顯的退行性變，軟骨分層模糊，細胞排列紊亂，髁突軟骨表面纖維束剝脫，局部細胞成簇。實驗B組中B1組、B2組與對照

6、組無明顯差異，B3組存在分層模糊、細胞排列紊亂，髁突軟骨厚度變薄，且有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　(3)馬松三色染色觀察:
　　對照組:松質(zhì)骨結(jié)構(gòu)規(guī)則，礦化的成熟松質(zhì)骨（紅色）及未礦化完全的新骨（藍色）均存在，礦化的成熟松質(zhì)骨比例更大。
　　實驗組:實驗A組可觀察到不規(guī)則，錯亂的松質(zhì)骨結(jié)構(gòu)，三個時間點非成熟骨（藍色）所占比例（COL/TV）均明顯高于對照組(P＜0.05)，軟骨下骨中出現(xiàn)較大的髓腔。實驗B組鄰近軟

7、骨染成藍色的未礦化的松質(zhì)骨顯著增加。
　　(4) ALP免疫組織化學染色觀察:
　　對照組:ALP呈弱陽性表達，主要定位于軟骨下骨小梁。
　　實驗組:實驗A組和實驗B組ALP表達與同齡對照組相比均呈現(xiàn)出明顯增多的趨勢(P＜0.01)。
　　(5)TRAP染色和CK免疫組織化學染色觀察:
　　對照組:軟骨下骨TRAP陽性細胞分布較少，偶可見CK表達陽性的破骨細胞。
　　實驗組:實驗A組和實驗B組中TRA

8、P陽性細胞和CK陽性細胞數(shù)量均較同齡對照組多，且差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，實驗A組破骨細胞增多量更加明顯。
　　結(jié)論:
　　(1)通過粘結(jié)鑄造冠的方式可以建立穩(wěn)定可靠的大鼠早接觸咬合創(chuàng)傷模型，可用于進行咬合創(chuàng)傷的研究。
　　(2)咬合創(chuàng)傷可以導致大鼠髁突軟骨出現(xiàn)退行性改變，且這種組織學變化程度隨咬合創(chuàng)傷時間的延長更加明顯，同時也伴有一定的增殖反應(yīng)。
　　(3)髁突有一定的改建能力，去除咬合局部刺激因素，