BcL—2過度表達(dá)抑制妊娠期糖尿病臍靜脈平滑肌細(xì)胞的凋亡.pdf

1、目的：糖尿病是一組由遺傳和環(huán)境因素相互作用而引起的臨床綜合征，是較常見的內(nèi)分泌代謝障礙性疾病。隨著生活水平的提高和工業(yè)化的快速發(fā)展，糖尿病的發(fā)病率也在逐年升高。而在糖尿病人群中發(fā)生冠心病、失明，肢端壞死等嚴(yán)重并發(fā)癥均明顯高于非糖尿病人群。妊娠期糖尿病(GDM) 指妊娠期發(fā)生或發(fā)現(xiàn)的糖尿病。1979年，WHO將GDM列為糖尿病的一個(gè)獨(dú)立類型。GDM 對(duì)孕婦、胎兒、新生兒有諸多影響。 糖尿病病人極易發(fā)生各種血管病變，如血管內(nèi)中膜(i

2、ntima-media thicklless，IMT)增厚、動(dòng)脈硬化等。目前對(duì)于糖尿病血管并發(fā)癥的研究大多集中在高糖對(duì)細(xì)胞增殖的影響，一般認(rèn)為，糖尿病患者血管病變的重要表現(xiàn)是細(xì)胞增殖增加。然而，新的證據(jù)表明細(xì)胞的增殖與凋亡的平衡關(guān)系受到干擾對(duì)糖尿病血管病變的發(fā)生更為重要，即血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖與凋亡的平衡受到擾動(dòng)是糖尿病血管病變的重要機(jī)制之一，同時(shí)影響著血管重建及血管損傷。本研究發(fā)現(xiàn)GDM患者臍靜脈血管壁IMT較NP患者相比顯

3、著增厚。而IMT增厚是動(dòng)脈硬化早期的形態(tài)學(xué)改變，因而，臍靜脈IMT增厚必然對(duì)臍靜脈循環(huán)及物質(zhì)交換產(chǎn)生影響，也因此可能影響胎盤血流灌注，從而對(duì)新生兒產(chǎn)生影響。出現(xiàn)IMT增厚的原因可能為：一是VSMC增殖增加和/或凋亡減少，二是血管中層蛋白基質(zhì)含量增加?；诖?，我們?cè)O(shè)計(jì)了本實(shí)驗(yàn)，試圖通過以上實(shí)驗(yàn)及其擴(kuò)展研究，找到GDM患者臍靜脈血管壁IMT增厚的原因及其對(duì)胎盤血流灌注和新生兒的影響，為GDM的靶向治療提供一定的理論依據(jù)。 材料與方法

4、 研究對(duì)象共60例，其中GDM 30例，同時(shí)選取與GDM同期入院、同年齡組的健康孕婦30例(經(jīng)口服50g葡萄糖篩查無GDM傾向者)作為對(duì)照組。剖宮產(chǎn)時(shí)胎盤娩出后立即在距臍帶插入胎盤3cm處離斷臍帶，由被離斷臍帶中段切取4cm，放入無菌培養(yǎng)皿中。在無菌環(huán)境中迅速取出臍帶，并置于4℃預(yù)冷的Hanks液中，予以細(xì)胞培養(yǎng)。同時(shí)另取一段臍帶中段置于4％中性甲醛中固定，行HE染色及VG染色。 實(shí)驗(yàn)方法包括：1．對(duì)GDM及NP患者臍靜

5、脈的VGMC進(jìn)行體外培養(yǎng)，以MTT法檢測(cè)它們的增殖數(shù)量；2．利用Transwell 小室檢測(cè)各研究對(duì)象VSMC的體外遷移能力；3.VG染色檢測(cè)血管壁中層膠原纖維含量；4．流式細(xì)胞儀檢測(cè)經(jīng)Annexin V/PI 雙染的VSMC凋亡率；5．以RT-PCR法、Real-time PCR法及Western blotting 檢測(cè)抗凋亡蛋白Bcl-2在各研究對(duì)象的VSMC中的表達(dá)。 結(jié)果 1．同NP組相比，GDM 患者臍靜脈血管

6、壁IMT顯著增厚(187.56±2.62μm VS 102.45±1.25μm)。 2．同NP組相比，GDM組患者臍靜脈VSMC體外遷移能力增強(qiáng)(162.6±3.58 VS 50.6±3.51)。NP組VSMC經(jīng)高糖培養(yǎng)后其增殖能力及體外遷移能力與GDM患者相似。 3．GDM組與NP組臍靜脈血管壁中層膠原纖維含量無明顯差別。 4．同NP組相比，GDM組VSMC中Bcl-2的RNA及蛋白表達(dá)增強(qiáng)。NP組VSMC經(jīng)