賴氨匹林對人惡性黑色素瘤細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制.pdf

1、目的：研究賴氨匹林(Aspisol)對人惡性黑色素瘤A375細(xì)胞增殖、凋亡的調(diào)控作用及對細(xì)胞內(nèi) pERK1/2、Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響，探討賴氨匹林抗惡性黑色素瘤的作用機(jī)制，為拓寬賴氨匹林的臨床應(yīng)用范圍提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法：1.采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法檢測賴氨匹林對 A375細(xì)胞增殖的抑制作用。2.倒置顯微鏡下觀察A375細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。3.采用吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)雙染法于激光共聚焦顯

2、微鏡下觀察A375細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化。4.流式細(xì)胞儀(FCM)檢測不同濃度的賴氨匹林對A375細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用。5.應(yīng)用免疫印跡法(Western blotting)法檢測 A375細(xì)胞內(nèi) pERK1/2蛋白和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)。
　　結(jié)果：1. MTT法結(jié)果顯示：賴氨匹林可對A375細(xì)胞產(chǎn)生增殖抑制作用，并且隨著賴氨匹林濃度的增加及作用時(shí)間的延長，抑制作用亦增加，差異具有顯著性(P<0.05)。12mmol/L

3、的賴氨匹林在72h時(shí)對 A375細(xì)胞的生長抑制率最大，為(71.48±3.38)％。賴氨匹林作用于A375細(xì)胞48h和72h時(shí)，其抑制細(xì)胞生長的半數(shù)有效濃度分別為(9.81±1.30) mmol/L和(7.35±0.68) mmol/L。2.倒置顯微鏡下可見：賴氨匹林作用于A375細(xì)胞24h后，可致A375細(xì)胞密度減小、細(xì)胞變小、變圓，出現(xiàn)懸浮現(xiàn)象。3. AO/EB雙染后于激光共聚焦顯微鏡下可見：給藥組早期凋亡細(xì)胞多于對照組；并且隨著賴

4、氨匹林濃度的增加，早期凋亡細(xì)胞和晚期凋亡細(xì)胞均增多。4.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：賴氨匹林對A375細(xì)胞作用24h后，可誘導(dǎo)其發(fā)生早期凋亡，并且隨著賴氨匹林濃度的增加，其誘導(dǎo)凋亡的作用亦增大。12mmol/L賴氨匹林誘導(dǎo)A375細(xì)胞的早期凋亡率最高，可達(dá)17.85%。5.賴氨匹林對A375細(xì)胞內(nèi)pERK1/2蛋白表達(dá)的影響：賴氨匹林可以抑制ERK1/2的磷酸化，即下調(diào) pERK1/2的表達(dá)，且藥物濃度越大，抑制作用越明顯，差異具有顯著性(