MAP-2基因轉(zhuǎn)染抑制惡性黑色素瘤細(xì)胞生長(zhǎng)作用的研究.pdf

1、目的:以腺病毒-微管相關(guān)蛋白-2(Adenovirus-microtubule-associated protein-2,Ad-MAP-2)為載體,將MAP-2基因?qū)胧髳盒院谏亓鯞16C29、B16細(xì)胞系,研究MAP-2對(duì)惡性黑色素瘤(惡黑)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)影響,以探討MAP-2基因超表達(dá)抑制惡黑細(xì)胞生長(zhǎng)的作用及其作用機(jī)制,為惡黑的基因治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).方法:實(shí)驗(yàn)分為六部分:(1)將Ad-MAP-2載體感染人胚腎(HEK293)細(xì)胞,利

2、用空斑實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定腺病毒的滴度.(2)將Ad-MAP-2載體以MOI值3.5感染B16細(xì)胞,以生理鹽水作為對(duì)照,觀察感染前后細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,計(jì)數(shù)感染前后細(xì)胞的數(shù)量變化,利用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS11.5進(jìn)行數(shù)據(jù)分析.(3)光鏡對(duì)B16C29細(xì)胞感染前后的形態(tài)學(xué)進(jìn)行連續(xù)觀察.(4)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(PI-ANNEXIN-V 染色方法)檢測(cè)MAP-2基因?qū)隑16、B16C29細(xì)胞后的細(xì)胞凋亡情況.(5)電子顯微鏡觀察MAP-2基因?qū)牒蠹?xì)胞突起

3、和細(xì)胞內(nèi)微管的改變.結(jié)論:(1)MAP-2在B16細(xì)胞內(nèi)的超表達(dá),可對(duì)其生長(zhǎng)起抑制作用.(2)MAP-2基因超表達(dá)能夠誘導(dǎo)B16C29、B16細(xì)胞的凋亡,并且該變化是其抑制惡黑細(xì)胞生長(zhǎng)的原因之一.(3)Ad-MAP-2感染惡黑B16C29細(xì)胞后,可恢復(fù)或部分恢復(fù)惡黑細(xì)胞的樹(shù)突狀形態(tài).(4)MAP-2基因在惡黑細(xì)胞B16內(nèi)的超表達(dá),可以使微管數(shù)量增加,微管延長(zhǎng)、變粗,集合成束,沿細(xì)胞突起延伸,并且該變化是使細(xì)胞樹(shù)突形狀恢復(fù)的主要原因之一.