共振光散射技術(shù)在蛋白質(zhì)分析檢測中的應(yīng)用研究.pdf

1、共振光散射技術(shù)是上個(gè)世紀(jì)90年代興起的一門新型的檢測技術(shù)，因操作簡單、靈敏度高、快速、光譜具有特征性而備受廣大分析工作者的關(guān)注。目前該技術(shù)已應(yīng)用于材料科學(xué)、天文學(xué)、生命科學(xué)、環(huán)境科學(xué)以及分析化學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域的分析檢測工作。
　　蛋白質(zhì)是生命的基礎(chǔ)，血清蛋白在生物體內(nèi)起著運(yùn)輸、免疫、維持體內(nèi)滲透壓、緩沖和營養(yǎng)等作用。因此、準(zhǔn)確的對血清蛋白的含量檢測，對疾病的診斷在生物醫(yī)學(xué)上有著重要的意義。研究小分子與血清蛋白的作用機(jī)理，對揭示血清蛋白

2、的運(yùn)輸機(jī)理，對藥物的運(yùn)輸和藥效研究有著一定的指導(dǎo)意義。
　　本論文的工作主要包括兩大方面：第一：建立了三種檢測血清白蛋白(BSA)的新方法；第二：考察了兩種小分子與牛血清白蛋白的作用機(jī)理。本論文的研究內(nèi)容如下：
　　(1)建立了孔雀石綠與Zn(Ⅱ)、剛果紅與Cu(Ⅱ)和櫻桃紅體系三種檢測BSA的新方法，其共振光散射增強(qiáng)信號(hào)分別位于372 nm、532 nm與340nm處。線性方程分別為：IRLS=20.3+0.82ρ(μg/

3、mL)、IRLS=145.8+210.3ρ(μg/mL)、IRLS=1187.9+32.16ρ(μg/mL)，線性范圍為0.1~25μg/mL、0~2.0μg/mL、1.0~60.0μg/mL，檢出限分別為0.06μg/mL、0.005μg/mL、0.15μg/mL。據(jù)此建立了牛血清白蛋白的RLS檢測新方法，三種新的檢測方法對合成樣進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，RSD值均小于3.0％，結(jié)果令人滿意。
　　(2)利用熒光光譜法、同步熒光光譜法和

4、紫外光譜法分別研究了藥物分子頭孢曲松鈉(CS)、四碘熒光素鈉(FSS)和BSA之間的相互作用。結(jié)果表明CS對BSA的熒光淬滅為靜態(tài)淬滅，由熱力學(xué)參數(shù)的變化表明他們之間的作用力主要是靜電作用力，可能還存在疏水作用力。同步熒光光譜表明，CS與BSA的結(jié)合位點(diǎn)應(yīng)該在BSA的色氨酸附近，并且CS的結(jié)合使BSA的構(gòu)象發(fā)生了變化。根據(jù)偶極-偶極非輻射能量轉(zhuǎn)移理論計(jì)算得出CS與BSA之間的結(jié)合距離為4.61 nm，CS使BSA熒光淬滅屬于非輻射能量轉(zhuǎn)