共振光散射技術(shù)在核酸分析上的應(yīng)用.pdf

1、核酸是遺傳信息的載體和基因表達(dá)的物質(zhì)基礎(chǔ),在生命科學(xué)中起著十分重要的作用.核酸研究是現(xiàn)代生物學(xué)、生物化學(xué)和醫(yī)學(xué)中重要的研究領(lǐng)域.在核酸的化學(xué)研究領(lǐng)域中,小分子用作癌化學(xué)治療劑、核酸染色劑及結(jié)構(gòu)探針等一直是非常活躍的研究方向.而化學(xué)以其先進的設(shè)備和靈敏的檢測手段,為核酸的研究提供了堅實的基礎(chǔ).共振光散射技術(shù)(Resonance Light Scattering)是近些年迅速發(fā)展起來的新的儀器分析技術(shù),因其靈敏度高、操作簡單等顯著特點而備受

2、關(guān)注.共振光散射技術(shù)簡化了光散射分析的儀器設(shè)備,操作簡單易行,有利于對大批量樣品的測定.因此共振光散射技術(shù)在化學(xué)分析中有著廣泛的實用價值和應(yīng)用前景.該文采用共振光散射技術(shù)建立了幾種新的DNA分析方法,并利用共振光散射技術(shù)探討了小分子物質(zhì)與DNA的作用機理.全文分為三個部分:第一部分:DNA在有機酸介質(zhì)中的共振光散射光譜研究.在甲酸、乙酸、丙酸、正丁酸、三氯乙酸、三氟乙酸介質(zhì)中小牛胸腺DNA的共振散射光譜都有不同程度的增強,而在三氯乙酸介

3、質(zhì)中,小牛胸腺DNA的散射光強度最大、穩(wěn)定性最好.0.2mol/L的三氯乙酸介質(zhì)中,小牛胸腺DNA在0.05 μg/mL~50μg/mL、魚精子DNA在0.05μg/mL~40 μg/mL的范圍內(nèi)散射光強度與濃度有著良好的線性關(guān)系,檢出限為12.24 ng/mL的小牛胸腺DNA和17.94 ng/mL的魚精子DNA.濃度為4 μg/mL的核苷酸、0.1 μg/mL的蛋白質(zhì)、多數(shù)金屬離子在1.0×10<'-5>mol/L的濃度時對小牛胸腺

4、DNA在三氯乙酸介質(zhì)中的散射光強度沒有影響,由此建立了一種三氯乙酸作為共振散射探針測定DNA的新方法.該方法已成功用于四個合成樣品中小牛胸腺DNA和魚精子DNA含量的測定.第二部分:阿霉素與DNA作用的共振光散射研究.試驗表明,在pH=2.21~11.98的Britton-Robinson緩沖溶液中,小牛胸腺DNA的加入導(dǎo)致阿霉素的共振光散射光譜增強,在322 nm與564 nm處產(chǎn)生兩個強烈的共振散射峰.建立了一種阿霉素作為共振散射探

5、針測定DNA的方法.由于DNA與阿霉素相互作用的特異性,該分析方法具有較高的選擇性.第三部分:多胺與DNA作用的共振光散射研究.研究了三種常見多胺與小牛胸腺DNA作用的共振光散射光譜.發(fā)現(xiàn)在pH=2.21~9.15的Britton-Robinson緩沖溶液中,小牛胸腺DNA的加入導(dǎo)致精胺共振光散射光譜的增強,在343 nm處產(chǎn)生強烈的共振散射峰.小牛胸腺DNA的濃度在0.1~40 μg/mL的范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系和較高的靈敏度,相關(guān)系