共振光散射技術(shù)在蛋白質(zhì)和核酸分析中的研究及應(yīng)用.pdf

1、共振光散射技術(shù)是Pastemack等于1993年建立的新的分析技術(shù)，并對(duì)生物大分子的識(shí)別、組裝和聚集進(jìn)行了研究，從而引起了人們的極大興趣。
　　 蛋白質(zhì)和核酸兩類生物大分子都是生命的主要基本物質(zhì)，在生命活動(dòng)中扮演著重要角色。目前，關(guān)于蛋白質(zhì)和核酸與有機(jī)分子之間相互作用的研究是生物大分子研究中的一個(gè)重要領(lǐng)域。它對(duì)于研究蛋白質(zhì)、核酸的生物化學(xué)反應(yīng)，發(fā)展蛋白質(zhì)、核酸醫(yī)藥制品，了解抗癌藥物的治療機(jī)理，簡(jiǎn)便快速地進(jìn)行體外篩選抗癌藥物，指導(dǎo)

2、設(shè)計(jì)和合成新藥以及對(duì)疾病的診斷，防治和合理用藥均有重要的意義。
　　 本文在查閱大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，選擇了幾種有機(jī)或抗癌藥物小分子，用共振光散射光譜法并結(jié)合吸光光度法、熒光光譜法以及核磁共振光譜法研究了他們與蛋白質(zhì)或核酸的相互作用，根據(jù)共振光散射光譜信號(hào)的改變值與蛋白質(zhì)和核酸的濃度成正比的特點(diǎn)，建立了幾種測(cè)定納克級(jí)蛋白質(zhì)或核酸的新方法。這些方法具有簡(jiǎn)單、快速，靈敏高和重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，結(jié)果令人滿意。
　　 本論文分為五章。<

3、br>　　 第一章概述了蛋白質(zhì)和核酸的研究進(jìn)展，共振光散射技術(shù)的原理和定量分析基礎(chǔ)，及其在蛋白質(zhì)和核酸分析中研究與應(yīng)用。
　　 第二章研究了鈦色敏-蛋白質(zhì)體系的共振散射光譜特征，并結(jié)合吸收光譜法和一系列條件實(shí)驗(yàn)初步探討了它們的作用機(jī)理，建立了一種測(cè)定納克級(jí)蛋白質(zhì)的新方法。在pH4.05的Walpole (NaAc-HCl) 緩沖溶液中，體系在339nm 處產(chǎn)生最大的共振光散射信號(hào)。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下ΔIRLS與BSA在0.0-0

4、.2和0.2-8.0mg/L的濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.9992和0.9996，檢測(cè)限為8.3ng/mL；與HAS 在0.0-0.4和0.4-5.0mg/L的濃度范圍內(nèi)呈線形關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.9995和0.9993，檢測(cè)限為7.4ng/mL。該方法用于人血清樣中總蛋白的測(cè)定，結(jié)果令人滿意。
　　 第三章研究了依來鉻紅B-十二烷基磺酸鈉-蛋白質(zhì)體系的共振散射光譜特征，并結(jié)合吸收光譜法和一系列條件實(shí)驗(yàn)初步探討了它

5、們的作用機(jī)理，建立了一種測(cè)定納克級(jí)蛋白質(zhì)的新方法。在pH2.87的Brittion-Robinson 緩沖溶液中，體系在563nm 處產(chǎn)生最大的共振光散射信號(hào)。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下Δ IRLS 與HAS 在0.0-2.0和2.0-8.0mg/L的濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.9997和0.9996，檢測(cè)限為22.6ng/mL。與BSA 在0.0-3.5和3.5-12.5mg/L的濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.9992和0

6、.9998，檢測(cè)限為12.0ng/mL。該方法用于人血清樣和牛奶樣中總蛋白的測(cè)定，結(jié)果令人滿意。
　　 第四章研究了五號(hào)專利蘭-十六烷基三甲基溴化銨-核酸體系的共振散射光譜特征，并結(jié)合吸收光譜法、核磁共振光譜和一系列條件實(shí)驗(yàn)探討了它們的作用機(jī)理，建立了一種測(cè)定納克級(jí)核酸的新方法。在pH9.9的Brittion-Robinson 緩沖溶液中，該體系在345nm 處產(chǎn)生最大的共振光散射信號(hào)。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下Δ IRLS與fsDNA、

7、ctDNA、yRNA分別在0-2.0、0-1.6和0-1.5mg/L的濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.9991、0.9992和0.9989，檢測(cè)限分別為10.2 ng/mL、15.4ng/mL和14.6ng/mL。該方法用于合成樣品中核酸的測(cè)定，結(jié)果令人滿意。
　　 第五章在pH4.55的NaAc-Hac 緩沖溶液條件下，結(jié)合多種光譜法包括熒光光譜法、吸收光譜法、共振光散射光譜法和核磁共振光譜法研究了抗腫瘤藥物他莫昔芬與