CdS熒光技術(shù)在食品蛋白質(zhì)檢測(cè)中的應(yīng)用研究.pdf

1、蛋白質(zhì)是生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是構(gòu)成生物體細(xì)胞組織的重要成分，是生物體發(fā)育及修補(bǔ)組織的原料。蛋白質(zhì)在維持人體內(nèi)的酸堿平衡、傳遞遺傳信息、調(diào)節(jié)代謝、催化生物體內(nèi)各種反應(yīng)進(jìn)行等方面都起著至關(guān)重要的作用。食品中蛋白質(zhì)的分離、定性及定量分析是食品檢驗(yàn)中最重要的工作。隨著分析手段的不斷進(jìn)步，對(duì)食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定方法也正向準(zhǔn)確和快速的方向發(fā)展。
　　 近年來，利用熒光試劑或有機(jī)染料與蛋白質(zhì)作用，結(jié)合熒光光度法定量測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法得到了很大

2、的發(fā)展，此方法具有靈敏度高，線性范圍寬，檢出限低，操作簡單、快速等特點(diǎn)，適用于常規(guī)分析。而新型熒光試劑量子點(diǎn)的出現(xiàn)，對(duì)該方法的研究起了很大的推動(dòng)作用，量子點(diǎn)具有激發(fā)光譜寬且連續(xù)分布、發(fā)射光譜窄而對(duì)稱、光譜可調(diào)諧、穩(wěn)定性好、抗漂白能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，這些特殊的光學(xué)性質(zhì)，使其在分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、基因組學(xué)、藥物篩選、生物大分子相互作用等研究中有極大的應(yīng)用前景，但是利用量子點(diǎn)測(cè)定食品中蛋白質(zhì)含量的研究報(bào)道較少。
　　 本文以熒光光度法為

3、檢測(cè)手段，合成具有優(yōu)異光學(xué)性質(zhì)的熒光試劑，使其與蛋白質(zhì)作用，探尋定量測(cè)定蛋白質(zhì)更簡單、更靈敏的方法，并用于樣品檢測(cè)。主要研究內(nèi)容包括：
　　 一．綜述了蛋白質(zhì)測(cè)定方法，量子點(diǎn)合成及其在生物分子檢測(cè)中的應(yīng)用。
　　 二．建立了CdS—牛血清白蛋白(BSA)熒光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的新方法：在pH為7．50的B—R緩沖溶液中，CdS與BSA作用，使CdS本身的熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。該方法用于牛奶、蛋清中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，并與雙縮

4、脲法作對(duì)照，結(jié)果滿意。
　　 三．研究了多種表面活性劑對(duì)CdS—BSA體系熒光特性的影響：結(jié)果表明，陽離子表面活性劑如十六烷基三甲基溴化銨(CTMAB)對(duì)體系有顯著的增敏作用，而陰離子表面活性劑如十二烷基硫酸鈉(SDS)有猝滅作用，且有乳狀沉淀產(chǎn)生，非離子表面活性劑如吐溫—20對(duì)體系的熒光強(qiáng)度影響較小，在此基礎(chǔ)上選擇CTMAB與體系作用，建立了測(cè)定蛋白質(zhì)含量的新方法。在pH8．50的硼酸—硼砂緩沖溶液中，CTMAB的加入，可以使

5、體系的熒光峰顯著增強(qiáng)。該方法可用于肉松、豆?jié){中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，與考馬斯亮藍(lán)法作對(duì)照，結(jié)果滿意。
　　 四．前文中基于BSA能使CdS熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，建立了測(cè)定蛋白質(zhì)的方法。但是BSA直接與CdS作用，在使CdS熒光強(qiáng)度增強(qiáng)的同時(shí)，其熒光吸收峰發(fā)生藍(lán)移，從而給測(cè)定結(jié)果造成一定的影響。本文經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，先使8—羥基喹啉與CdS作用(pH8．90的硼酸—硼砂緩沖溶液)，CdS的熒光強(qiáng)度降低，且吸收峰藍(lán)移至510nm，然后再加入BSA

6、，體系的熒光吸收峰仍在510nm處不變，熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，并且在一定濃度范圍內(nèi)，體系的熒光強(qiáng)度與BSA的濃度呈良好的線性關(guān)系，據(jù)此建立了CdS—8—羥基喹啉熒光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的新方法。該法用于肉松、雞精、奶粉等食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，并與雙縮脲法做對(duì)照，結(jié)果滿意。
　　 五．實(shí)驗(yàn)以水溶法制備了具有核殼結(jié)構(gòu)的CdS/ZnO微粒，研究了該微粒與牛血清白蛋白作用后體系的熒光特性，建立了CdS/ZnO熒光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的新方法：在p

7、H6．10的KH2PO4—Na2HPO4緩沖溶液中，CdS/ZnO與牛血清白蛋白(BSA)反應(yīng)后，熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，并且熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)與牛血清白蛋白的濃度有良好的線性關(guān)系。該法用于食品和尿液中蛋白質(zhì)的測(cè)定，并與考馬斯亮藍(lán)法比較，結(jié)果滿意。
　　 六．與課題相關(guān)的其它研究：(1)以乙酸鋅為鋅源，硫化鈉為硫源，巰基乙酸為修飾劑水相合成了ZnS微粒?；赯nS微粒能與結(jié)晶紫反應(yīng)使結(jié)晶紫的吸光度降低，加入牛血清白蛋白反應(yīng)后，體系的吸光度

8、顯著增強(qiáng)，據(jù)此建立了結(jié)晶紫—ZnS—BSA分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)的新方法。該法用于肉松、酸奶等食品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，與考馬斯亮藍(lán)法做對(duì)照，結(jié)果滿意；(2)研究了食品中糖精鈉含量的一種新的測(cè)定方法，在pH7．00的Britton—Robinson(B—R)緩沖溶液中，結(jié)晶紫與糖精鈉作用可使結(jié)晶紫吸光度顯著增強(qiáng)，據(jù)此建立了結(jié)晶紫—紫外光度法測(cè)定食品中糖精鈉含量的新方法。該方法應(yīng)用于食品中糖精鈉含量的測(cè)定，與國標(biāo)法—高效液相色譜法對(duì)照，結(jié)果滿