牛乳蛋白質(zhì)檢測(cè)技術(shù)的研究.pdf

1、乳制品安全的核心問題是乳源蛋白質(zhì)的檢測(cè)。本課題研究比較了凱氏定氮法(Kjeldahl)和四種分光光度法對(duì)牛乳與其模擬摻假樣中蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)，并應(yīng)用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)法和高效毛細(xì)管電泳(HPCE)法對(duì)牛乳中的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離分析。
　　 牛乳蛋白含量的凱氏定氮法測(cè)定，以牛乳及摻入不同濃度的尿素及三聚氰胺為樣品，凱氏定氮法結(jié)合三氯乙酸沉淀確定牛乳蛋白質(zhì)的理論值，含不同量尿素樣品的蛋白測(cè)定值的誤差率

2、小于3.54％、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于1.93％，該類樣品中蛋白含量和理論值沒有顯著性差異，P值大于0.05；而摻入不同量三聚氰胺樣品中蛋白測(cè)定值和理論值存在顯著性差異，P值小于0.05，且隨著摻假比例的增高，誤差率不斷增大?？梢姡瑒P氏定氮法能準(zhǔn)確檢測(cè)到牛乳與摻入尿素牛乳的蛋白量，但對(duì)摻入三聚氰胺牛乳的蛋白量難以準(zhǔn)確檢測(cè)。
　　 牛乳蛋白含量的分光光度法測(cè)定，以凱氏定氮法測(cè)定的牛乳蛋白質(zhì)理論值為依據(jù)，應(yīng)用雙縮脲法(Biure

3、t)、福林酚法(Lowry)、考馬斯亮藍(lán)法(Bradford)和4，4＇-二羧基-2，2＇-聯(lián)喹啉法(BCA)，對(duì)摻假牛乳進(jìn)行檢測(cè)，其中考馬斯亮藍(lán)法不能準(zhǔn)確測(cè)定牛乳蛋白質(zhì)含量，在牛乳中摻入尿素和三聚氰胺的檢測(cè)中誤差率均大于21.56％和20.4％，且P值小于0.05。雙縮脲比色法，福林酚法和4，4＇-二羧基-2，2＇-聯(lián)喹啉法能準(zhǔn)確檢測(cè)牛乳蛋白質(zhì)含量。這三種方法在檢測(cè)牛乳中摻入尿素和三聚氰胺的樣品時(shí)誤差率依次為：雙縮脲比色法小于2.99

4、％和1.55％、福林酚法小于2.99％和2.04％、4，4＇-二羧基-2，2＇-聯(lián)喹啉法小于3.13％和1.54％；且三種方法的P值大于0.05，實(shí)測(cè)值和理論值沒有顯著性差異。結(jié)果表明，除考馬斯亮藍(lán)法外，其它三種方法均能真實(shí)的測(cè)定出牛乳中摻入尿素和三聚氰胺時(shí)的蛋白含量。
　　 牛乳及摻假乳中蛋白質(zhì)的十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析技術(shù)研究。確定分離膠濃度為12.5％、濃縮膠濃度為3％的不連續(xù)垂直穩(wěn)流電泳

5、，實(shí)驗(yàn)可以得到較好的乳蛋白分離分析圖譜。對(duì)牛乳中摻入不同濃度大豆蛋白粉、明膠和乳清粉分別用SDS-PAGE電泳檢測(cè)，應(yīng)用凝膠圖像分析軟件分析電泳圖譜，結(jié)果表明SDS-PAGE可以檢測(cè)牛乳中摻入的乳源蛋白質(zhì)（乳清粉）和異源蛋白質(zhì)（明膠、大豆蛋白粉），其檢出限分別為4.4mg/mL、0.87mg/mL和0.79mg/mL。
　　 牛乳及摻假乳中蛋白的高效毛細(xì)管電泳分析應(yīng)用研究。毛細(xì)管電泳條件為未涂層的熔融石英毛細(xì)管，磷酸鹽緩沖液(p

6、H=2.5)，柱溫35℃，分離電壓26kV，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)214nm，在30min內(nèi)可以實(shí)現(xiàn)牛乳及摻假牛乳中蛋白質(zhì)的分離，5種主要乳蛋白在不同線性范圍內(nèi)的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.997，各乳蛋白的遷移時(shí)間和峰面積的RSD分別小于0.34％和4.65％。通過牛乳混樣與不同比例的摻假乳（大豆分離蛋白，明膠，乳清蛋白）比較分析，可以確定出摻假蛋白的特征峰，可用于定性測(cè)定，樣品摻入30％的大豆分離蛋白、明膠、乳清粉溶液通過峰面積可以計(jì)算牛乳中摻假蛋