自噬和Rab9在APPswe-PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠神經(jīng)元變性中的作用.pdf

1、目的
　　以APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠為對象,研究Rab9及自噬在阿爾茨海默病神經(jīng)元變性過程中的作用。
　　方法
　　1.采用PCR技術對小鼠基因型進行鑒定。
　　2.通過曠場實驗和新穎物體探索實驗分別對6月齡和12月齡Tg-APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠和同齡同性別野生型小鼠進行自主探索活動和情感變化的檢測。
　　3.采用免疫組化和免疫熒光技術分別對12月齡Tg-APPswe/PS1dE

2、9轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型兩組小鼠腦組織中Aβ1-16、LC3B、Rab9和Vimentin的表達進行檢測。
　　4.采用免疫熒光技術對12月齡的Tg-APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織進行vimentin和硫磺素-S雙重標記以顯示老年斑與vimentin陽性細胞的空間位置關系。
　　5.采用WesternBlot技術分別對12月齡Tg-APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠和野生型小鼠腦組織中LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ、R

3、ab9和Vimentin蛋白進行定量檢測。
　　結果
　　1.在曠場實驗中,6月齡Tg-APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠的探索活性與對照組野生型小鼠相比無明顯變化,且不存在焦慮傾向;12月齡時,Tg-APPswe/PS1dE9轉(zhuǎn)基因小鼠的探索活性降低且可能更具有焦慮傾向(P<0.05);而在新物體識別任務中,轉(zhuǎn)基因小鼠與野生型小鼠表現(xiàn)類似,無統(tǒng)計學差異。
　　2.12月齡Tg-APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小

4、鼠的新皮層及海馬區(qū)域有大量呈典型“有致密核心”的老年斑分布。
　　3.LC3B分布于新皮層神經(jīng)細胞及海馬錐體神經(jīng)元的核周及突起;12月齡的Tg-APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)LC3B和LC3B-Ⅱ的表達較同齡野生型小鼠明顯增多(P=0.0005,P<0.0001)。
　　4.Rab9表達呈顆粒狀,聚集為“半月形”,分布于核周區(qū);12月齡的Tg-APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)Rab9的表達與同齡野生型小

5、鼠相比無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。
　　5.Vimentin主要分布在神經(jīng)細胞核周及神經(jīng)突起中。在12月齡的Tg-APPswe/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠皮層區(qū)的老年斑周圍可以見到vimentin陽性細胞聚集;而在海馬區(qū)域,vimentin陽性細胞數(shù)則較同齡野生型小鼠明顯減少(P=0.005);腦組織中的viemntin總的表達水平較同齡野生型小鼠顯著降低(P=0.0289)。
　　結論
　　APPswe/PS1dE9