S1P-mTOR信號(hào)通路在腦缺血后神經(jīng)元自噬中的作用研究.pdf

1、目的：研究S1P受體激動(dòng)劑FTY-720對(duì)光化學(xué)造模后小鼠急性期內(nèi)梗死體積、神經(jīng)元凋亡，以及神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，并探討FTY-720對(duì)腦缺血急性期星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響；研究S1P對(duì)腦缺血后自噬的作用，并探索其作用機(jī)制是否與mTOR/p70S6K通路相關(guān)；利用S1P抑制劑DMS證明S1P對(duì)自噬的作用及其相關(guān)作用機(jī)制。
　　方法：建立小鼠光化學(xué)腦缺血模型，采用TTC染色確定模型制作的成功；應(yīng)用MRI掃描監(jiān)測(cè)缺血后不同時(shí)間

2、點(diǎn)FYT-720對(duì)缺血后梗死體積的影響；應(yīng)用尼氏染色檢測(cè)FYT-720對(duì)缺血后神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，TUNEL和DAPI雙標(biāo)技術(shù)檢測(cè)缺血邊緣區(qū)細(xì)胞凋亡；采用western blot技術(shù)檢測(cè)caspase-3，LC3,Beclin1,p62,mTOR,p70S6K的表達(dá)變化；應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)腦缺血后LC3,Beclin1蛋白的表達(dá)特點(diǎn)以及星形膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖，小膠質(zhì)細(xì)胞的活化；采用透射電鏡技術(shù)觀察缺血后自噬小體的形成；采用改良 mNS

3、S行為學(xué)評(píng)分評(píng)估小鼠光化學(xué)造模后的神經(jīng)功能恢復(fù)。
　　結(jié)果：S1P受體激動(dòng)劑FTY-720可明顯縮小腦缺血后梗死體積，改善神經(jīng)功能缺損，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)；FTY-720能夠明顯改善缺血損傷后神經(jīng)元的損傷，減少神經(jīng)元的凋亡，降低凋亡蛋白caspase-3的水平，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化及星形膠質(zhì)細(xì)胞活化，減少膠質(zhì)瘢痕形成；腦缺血缺氧可激活自噬系統(tǒng)，自噬相關(guān)蛋白LC3,Beclin1主要表達(dá)于神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)較少；S1P受體激動(dòng)劑F