S1P-mTOR信號通路在腦缺血后神經(jīng)元自噬中的作用研究.pdf

1、目的：研究S1P受體激動劑FTY-720對光化學造模后小鼠急性期內(nèi)梗死體積、神經(jīng)元凋亡，以及神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，并探討FTY-720對腦缺血急性期星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞活化的影響；研究S1P對腦缺血后自噬的作用，并探索其作用機制是否與mTOR/p70S6K通路相關(guān)；利用S1P抑制劑DMS證明S1P對自噬的作用及其相關(guān)作用機制。
　　方法：建立小鼠光化學腦缺血模型，采用TTC染色確定模型制作的成功；應(yīng)用MRI掃描監(jiān)測缺血后不同時間

2、點FYT-720對缺血后梗死體積的影響；應(yīng)用尼氏染色檢測FYT-720對缺血后神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，TUNEL和DAPI雙標技術(shù)檢測缺血邊緣區(qū)細胞凋亡；采用western blot技術(shù)檢測caspase-3，LC3,Beclin1,p62,mTOR,p70S6K的表達變化；應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測腦缺血后LC3,Beclin1蛋白的表達特點以及星形膠質(zhì)細胞活化增殖，小膠質(zhì)細胞的活化；采用透射電鏡技術(shù)觀察缺血后自噬小體的形成；采用改良 mNS

3、S行為學評分評估小鼠光化學造模后的神經(jīng)功能恢復(fù)。
　　結(jié)果：S1P受體激動劑FTY-720可明顯縮小腦缺血后梗死體積，改善神經(jīng)功能缺損，促進神經(jīng)功能恢復(fù)；FTY-720能夠明顯改善缺血損傷后神經(jīng)元的損傷，減少神經(jīng)元的凋亡，降低凋亡蛋白caspase-3的水平，抑制小膠質(zhì)細胞活化及星形膠質(zhì)細胞活化，減少膠質(zhì)瘢痕形成；腦缺血缺氧可激活自噬系統(tǒng)，自噬相關(guān)蛋白LC3,Beclin1主要表達于神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細胞表達較少；S1P受體激動劑F