AMPK--mTOR通路在錳誘導PC12細胞自噬中的作用研究.pdf

1、目的:自噬是真核細胞中降解長壽命蛋白和調(diào)節(jié)細胞器代謝的主要機制，受到多種信號通路的調(diào)控。本研究以錳誘導PC12細胞建立錳中毒性帕金森綜合征體外細胞模型，探討AMPK-mTOR信號通路在錳誘導PC12細胞自噬中的作用，為錳中毒性帕金森綜合征的發(fā)病機制及藥物研究提供思路。
　　方法:根據(jù)不同濃度及不同作用時間錳對PC12細胞存活率的影響，選擇合適的錳濃度及作用時間，建立錳中毒性帕金森綜合征體外細胞模型，再給予Compound C進行干

2、預:CCK-8法檢測細胞存活率，透射電子顯微鏡觀察PC12細胞經(jīng)錳處理后的超微結(jié)構變化，分子水平檢測自噬標記蛋白LC3及AMPK-mTOR通路關鍵蛋白p-AMPK、p-mTOR、p-4E-BP1、p-p70S6K的表達變化。
　　結(jié)果:1、PC12細胞在不同錳濃度下分別作用24h、48h、72h，用CCK-8法檢測計算細胞存活率，染錳組與對照組間比較，P＜0.01，不同染錳組間比較，P＜0.01，同一染錳組在不同時間點間比較，P＜

3、0.01，差異均具有顯著性。2、PC12細胞按Control組、Mn組、CC組、Mn+CC組分別加藥處理24h，CCK-8法檢測計算Control組細胞存活率為(100.00±0)％，Mn組、CC組、Mn+CC組細胞存活率均較Control組下降，P＜0.01，差異有顯著性，而Mn組與Mn+CC組相比，Mn+CC組細胞存活率較大，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學意義。3、PC12細胞經(jīng)錳處理后，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表達量增加，呈濃度和時間依

4、賴性(P＜0.01)。4、透射電子顯微鏡下可見染錳組細胞內(nèi)自噬體及自噬溶酶體增加。5、與對照組相比，Mn組PC12細胞中p-AMPK、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白的相對表達量明顯增多(P＜0.01)，p-mTOR、p-p70S6K、p-4E-BP1蛋白的相對表達量顯著減少(P＜0.01);而Mn+CC組中p-AMPK、p-mTOR、p-p70S6K、p-4E-BP1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表達量均介于Control組與Mn組之間(P＜0