ESE1表達(dá)在大鼠腦缺血再灌注后海馬神經(jīng)元凋亡中的作用研究.pdf

1、目的:通過構(gòu)建腦缺血再灌注損傷的在體和細(xì)胞模型，研究腦缺血再灌注后海馬CA1區(qū)上皮特異性ETS-1(ESE1)的表達(dá)情況，探討其對神經(jīng)元凋亡可能的作用機(jī)制。
　　方法:采用改良的Pulsinelli四血管阻斷法制備大鼠全腦缺血再灌注模型，將健康雄性大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、腦缺血再灌注6h、12h、24h、48h、72h組。采用Western blot方法檢測ESE1、NF-κB活化指標(biāo)磷酸化p65(p-p65)及凋亡指標(biāo)active

2、 caspase3蛋白在腦缺血再灌注不同時(shí)間點(diǎn)海馬組織的表達(dá)情況;用免疫組織化學(xué)方法進(jìn)一步研究ESE1在腦內(nèi)海馬CA1區(qū)的表達(dá)情況;通過免疫熒光雙標(biāo)法明確腦內(nèi)ESE1在腦缺血再灌注后海馬組織腦細(xì)胞中的定位情況，以及與神經(jīng)細(xì)胞凋亡標(biāo)記物active caspase3的關(guān)系。同時(shí)采用二氯化鈷(CoCl2)刺激PC12細(xì)胞建立神經(jīng)元化學(xué)缺氧性損傷模型，檢測細(xì)胞缺氧后ESE1、p-p65和active caspase3蛋白表達(dá)的變化，隨后構(gòu)建E

3、SE1RNA干擾載體抑制PC12細(xì)胞中ESE1的表達(dá)，檢測刺激后凋亡指標(biāo)active caspase3、p-p65等指標(biāo)的變化。
　　結(jié)果:
　?。ㄒ唬┰隗w實(shí)驗(yàn):①利用western blot發(fā)現(xiàn)ESE1、p-p65蛋白在假手術(shù)組中表達(dá)較低，腦缺血再灌注后6h表達(dá)開始上調(diào)，24h達(dá)到高峰，隨后表達(dá)逐漸下降但仍高于假手術(shù)組水平;active caspase3蛋白在假手術(shù)組中表達(dá)很低，缺血再灌注后6h表達(dá)增多，并逐漸升高，48h

4、達(dá)到高峰，隨后表達(dá)有所回落但仍高于假手術(shù)組水平。②利用免疫組織化學(xué)方法結(jié)果顯示，假手術(shù)組海馬CA1區(qū)ESE1蛋白表達(dá)較低;與假手術(shù)組相比較，在腦缺血再灌注后24h海馬CA1區(qū)ESE1蛋白陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多，表達(dá)增加，有顯著性差異。③利用免疫熒光雙標(biāo)法，結(jié)果顯示腦缺血再灌注24h海馬組織NeuN表達(dá)(+)細(xì)胞中ESE1表達(dá)為(+)，GFAP表達(dá)(+)細(xì)胞中ESE1表達(dá)為（-），Iba表達(dá)(+)細(xì)胞中ESE1表達(dá)為（-），ESE1表達(dá)(+)

5、細(xì)胞中active caspase3表達(dá)為(+)。
　　（二）離體實(shí)驗(yàn):采用western blot方法發(fā)現(xiàn)正常對照組ESE1、p-p65和active caspase3蛋白表達(dá)較低，與正常對照組相比較，ESE1、p-p65和active caspase3蛋白表達(dá)在CoCl2刺激PC12細(xì)胞1h后開始增多，逐漸上升，12h達(dá)到高峰，隨后下降但仍高于正常對照組;在干預(yù)PC12細(xì)胞中ESE1表達(dá)后，p-p65及active caspa