桃紅四物湯對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的治療作用研究.pdf

1、目的:
　　腦缺血再灌注損傷發(fā)生于多種腦血管疾病中，有著十分復(fù)雜的作用機(jī)制，目前仍沒有確切的治療方法以減輕腦缺血再灌注后所引起的神經(jīng)損傷。多數(shù)最新研究成果表明細(xì)胞凋亡在腦缺血再灌注損傷中起到重要作用，其中Caspase-3、p53已被證實(shí)與神經(jīng)元凋亡有著密切相關(guān)的關(guān)系。在臨床應(yīng)用中桃紅四物湯對(duì)缺血性腦血管疾病的治療有顯著效果，但是桃紅四物湯對(duì)抑制腦缺血再灌注損傷海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的凋亡機(jī)制仍不十分清楚。為此，本研究通過給藥于雄性S

2、D大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注模型高、中、低劑量的桃紅四物湯，擬揭示桃紅四物湯可通過抑制大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元Caspase-3、p53的表達(dá)而減少神經(jīng)元凋亡，進(jìn)一步證明桃紅四物湯對(duì)腦缺血再灌注損傷具有治療作用。
　　方法:
　　將100只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組（大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注組）、桃紅四物湯高劑量組(2.1g/kg)、中劑量組(1.4 g/kg)、低劑量組(0.7g/kg)共5組，每組20只。采用改良后的新式

3、線栓法制備雄性SD大鼠大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注模型。缺血90分鐘再灌注24h后，參照Garcia神經(jīng)功能評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)各組大鼠的神經(jīng)行為學(xué)功能，滿分為18分。綜合得分在6-12分者，方為造模成功。24h后，用高、中、低劑量的桃紅四物湯分別對(duì)桃紅四物湯高、中、低劑量組進(jìn)行連續(xù)7d的灌胃治療，每日兩次，早晚各一次;模型組和正常組則正常喂養(yǎng)。到第8d后，對(duì)各實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分并處死取腦;進(jìn)行TTC染色，使用Image-Pro-Plus軟件

4、測(cè)量各組大鼠腦梗死體積率;通過Nissl染色法顯示神經(jīng)元形態(tài);TUNEL法顯示凋亡神經(jīng)元形態(tài);免疫組織化學(xué)法測(cè)定Caspase-3、p53的表達(dá)情況;采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　1、神經(jīng)功能評(píng)分結(jié)果:大鼠神經(jīng)功能評(píng)分正常組均為18分;神經(jīng)功能評(píng)分模型組比正常組有明顯降低(p＜0.01）;神經(jīng)功能評(píng)分桃紅四物湯高、中、低劑量組均比模型組有明顯增加，且神經(jīng)功能評(píng)分隨著桃紅四物湯給藥劑量的增加而增加

5、(p＜0.01)。
　　2、TTC染色結(jié)果:大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元正常組均勻紅染無梗死灶形成，對(duì)比之下，大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元模型組形成大量蒼白梗死灶(p＜0.01),大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元桃紅四物湯高、中、低劑量組的梗死灶范圍均比模型組有明顯減少(0＜0.01），梗死灶范圍隨著給藥劑量的增加而減少(p＜0.05)。
　　3、Nissl染色結(jié)果:與大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元正常組相比，大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元模型組的海馬CA1區(qū)正

6、常神經(jīng)元數(shù)量有明顯減少(p＜0.01）;大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元桃紅四物湯高、中、低劑量組的大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元正常神經(jīng)元數(shù)量與模型組相比有明顯增加(p＜0.01），并隨著給藥劑量增加而增加(p＜0.05)。
　　4、TUNEL染色法結(jié)果:與大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元正常組相比，大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元模型組缺血再灌注區(qū)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元凋亡數(shù)量有明顯增加(p＜0.01);大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元桃紅四物湯高、中、低劑量組大鼠的海馬CA1

7、區(qū)神經(jīng)元凋亡數(shù)量與模型組相比有著明顯減少（p＜0.01，并隨著給藥劑量的增加而減少(p＜0.01)。
　　5、免疫組織化學(xué)染色法結(jié)果:與大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元正常組相比，大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元模型組的大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的Caspase-3、p53的陽性表達(dá)有顯著增加(p＜0.01;大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元桃紅四物湯高、中、低劑量組大鼠的大鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的Caspase-3、p53的陽性表達(dá)較模型組有明顯減弱(p＜0.01)