甘草素對(duì)去勢(shì)APP-PS1 雙轉(zhuǎn)基因小鼠作用的初步研究.pdf

1、目的：
　　本課題通過對(duì)APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠行雙側(cè)卵巢切除術(shù)建立絕經(jīng)模型，（1）探討雙側(cè)卵巢切除后不同時(shí)間段對(duì)阿爾茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）癡呆模型小鼠認(rèn)知記憶功能及自噬的影響。（2）探討植物雌激素-甘草素對(duì)去勢(shì)1周APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠認(rèn)知記憶功能及自噬的作用，為絕經(jīng)女性 AD患者的治療提供新的線索。
　　方法：
　　1、第一部分：建立穩(wěn)定可靠的小鼠絕經(jīng)（雙側(cè)卵巢切除，Bil

2、ateral ovariectomy，OVX）模型：將3月齡雌性APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠分別行雙側(cè)卵巢切除術(shù)和假手術(shù)，同齡 C57作為正常對(duì)照。術(shù)后1周、1月、3月運(yùn)用Morris水迷宮進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)，并分別稱量小鼠子宮重量，免疫組化檢測(cè)老年斑的變化，ELISA檢測(cè) Aβ40、Aβ42水平，Western blot檢測(cè)Beclin1、Lc3、P62的蛋白水平變化。
　　2、第二部分：觀察甘草素（Liquirtigenin, LG

3、）對(duì)去勢(shì)1周APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠作用：
　　（1）將3月齡雌性APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分為以下四組：假手術(shù)+試劑對(duì)照組(sham)、雙側(cè)卵巢切除+試劑對(duì)照組（OVX）、雙側(cè)卵巢切除+甘草素組（OVX+ LG）和雙側(cè)卵巢切除+雌二醇（17β-estradiol，E2）組（OVX+E2）；（2）模型建立1周后，各組給予相應(yīng)試劑或藥物處理，共處理90天；（3）Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力；（4）稱量子宮

4、重量；（5）免疫組化和甲硫素染色檢測(cè)小鼠腦內(nèi)老年斑沉積；（6）ELISA檢測(cè)腦內(nèi)Aβ含量；（7）采用western blot檢測(cè)ERα、ERβ、Beclin1、Lc3、P62蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　第一部分結(jié)果：雙側(cè)卵巢切除后1周對(duì) AD小鼠空間學(xué)習(xí)能力的影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，雙側(cè)卵巢切除1月、3月后，小鼠出現(xiàn)空間學(xué)習(xí)記憶能力減退。雙側(cè)卵巢切除會(huì)使小鼠子宮萎縮，重量減輕。雙側(cè)卵巢切除后1周，APP/PS1雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦內(nèi)

5、老年斑、Aβ均沒有明顯變化；手術(shù)后1月，可觀察到老年斑數(shù)量和斑塊面積均大于假手術(shù)組，Aβ40變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Aβ40顯著增多；WB檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白水平，可看到beclin1隨著手術(shù)時(shí)間延長(zhǎng)呈不斷下降趨勢(shì)；LC3手術(shù)后一周增加，術(shù)后1月、3月呈下降趨勢(shì)；P62在術(shù)后一周無明顯差異，術(shù)后1月、3月呈升高趨勢(shì)。
　　第二部分結(jié)果：甘草素治療3月后，Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)顯示，甘草素治療組小鼠空間學(xué)習(xí)能力提高；甘草素治療對(duì)子宮的影響無統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)差異，E2治療使子宮重量增加；甘草素治療與E2治療一樣均能使老年斑、Aβ減少，且兩組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；甘草素治療上調(diào) ERβ作用顯著，而E2治療均能顯著上調(diào)ERα、ERβ；甘草素、E2治療均能提高Beclin1、LC3蛋白水平，降低P62水平。
　　結(jié)論：
　　1、卵巢切除，性激素水平下降，會(huì)影響AD小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力，加重AD老年斑、Aβ沉積，性激素缺乏越久，表現(xiàn)越明顯，并且這些變化可能與自噬調(diào)節(jié)相關(guān)；
　　2、