應用酵母單雜交技術篩選平菇漆酶poxc轉錄因子研究.pdf

1、本研究以平菇菌株新831為研究對象，通過酵母單雜交技術篩選漆酶poxc基因的轉錄因子。主要研究內容及結論如下:
　　在漆酶基因poxc半定量的基礎上，通過Plantcare和Softberry分析，選取部分平菇漆酶poxc的啟動子區(qū)域，克隆到質粒pAbAi的多克隆位點上構建成誘餌質粒，轉化酵母菌Y1H感受態(tài)細胞得到誘餌菌株;選用平菇幼菇期子實體為材料提取總RNA，構建dscDNA文庫;把文庫轉到誘餌菌株感受態(tài)細胞中，經過SD/-L

2、eu/-Ura/AbA平板篩選，得到4條與poxc啟動子區(qū)域結合的蛋白的基因序列。
　　將序列依次命名為laccasetranscriptionfactor1(ltf1)、laccasetranscriptionfactor2(ltf2)、laccasetranscriptionfactor3(ltf3)、laccasetranscriptionfactor4(ltf4)，并提交到GeneBank，序列號為KJ720282、KJ7

3、20283、KJ720284、KJ720285。對其蛋白序列進行預測后，分析其疏水性、跨膜域、信號肽序列等，用SPOMA軟件預測了蛋白的二級結構，用SWISS-MODEL預測其三級結構。根據分析結果，ltf1與天冬氨酸轉氨酶具有16％的同源性，同時具有磷酸吡哆醛結合活性，但不是轉錄因子;ltf2與鐵硫蛋白轉運子基因、多重耐藥蛋白基因pgp1、ABC轉運子的MsbA蛋白基因均有50％的同源性;ltf3與斑萎蛋白同源性很高，與ltf2一樣，