應(yīng)用酵母單雜交技術(shù)篩選平菇漆酶poxc轉(zhuǎn)錄因子研究.pdf

1、本研究以平菇菌株新831為研究對(duì)象，通過酵母單雜交技術(shù)篩選漆酶poxc基因的轉(zhuǎn)錄因子。主要研究內(nèi)容及結(jié)論如下:
　　在漆酶基因poxc半定量的基礎(chǔ)上，通過Plantcare和Softberry分析，選取部分平菇漆酶poxc的啟動(dòng)子區(qū)域，克隆到質(zhì)粒pAbAi的多克隆位點(diǎn)上構(gòu)建成誘餌質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化酵母菌Y1H感受態(tài)細(xì)胞得到誘餌菌株;選用平菇幼菇期子實(shí)體為材料提取總RNA，構(gòu)建dscDNA文庫;把文庫轉(zhuǎn)到誘餌菌株感受態(tài)細(xì)胞中，經(jīng)過SD/-L

2、eu/-Ura/AbA平板篩選，得到4條與poxc啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合的蛋白的基因序列。
　　將序列依次命名為laccasetranscriptionfactor1(ltf1)、laccasetranscriptionfactor2(ltf2)、laccasetranscriptionfactor3(ltf3)、laccasetranscriptionfactor4(ltf4)，并提交到GeneBank，序列號(hào)為KJ720282、KJ7

3、20283、KJ720284、KJ720285。對(duì)其蛋白序列進(jìn)行預(yù)測后，分析其疏水性、跨膜域、信號(hào)肽序列等，用SPOMA軟件預(yù)測了蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)，用SWISS-MODEL預(yù)測其三級(jí)結(jié)構(gòu)。根據(jù)分析結(jié)果，ltf1與天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶具有16％的同源性，同時(shí)具有磷酸吡哆醛結(jié)合活性，但不是轉(zhuǎn)錄因子;ltf2與鐵硫蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)子基因、多重耐藥蛋白基因pgp1、ABC轉(zhuǎn)運(yùn)子的MsbA蛋白基因均有50％的同源性;ltf3與斑萎蛋白同源性很高，與ltf2一樣，