應(yīng)用酵母單雜交技術(shù)篩選柿DkPDC2互作轉(zhuǎn)錄因子的研究.pdf

1、完全甜柿自然脫澀存在兩種機理，分別為“稀釋效應(yīng)”和“凝固效應(yīng)”。日本原產(chǎn)完全甜柿（日本甜柿）以“稀釋效應(yīng)”為主，而中國原產(chǎn)完全甜柿（中國甜柿）既有“稀釋效應(yīng)”又有“凝固效應(yīng)”，而“凝固效應(yīng)”可能在中國甜柿自然脫澀中具有更重要的作用。已有研究表明，DkPDC2是乙醛代謝途徑中的關(guān)鍵基因，而乙醛與可溶性單寧結(jié)合形成不溶性單寧，但其調(diào)控機制尚不完全清楚。本試驗以中國甜柿‘羅田甜柿’為研究試材，通過酵母單雜交cDNA文庫篩選和互作分析，以期獲得

2、調(diào)控DkPDC2的轉(zhuǎn)錄因子與其影響中國甜柿自然脫澀的分子機制。
　　主要研究結(jié)果如下。
　　1.通過酵母文庫篩選獲得候選轉(zhuǎn)錄因子，將其命名為DkMYB9。通過酵母單雜試驗和雙熒光素酶試驗，驗證候選轉(zhuǎn)錄因子DkMYB9可以激活DkPDC2啟動子活性，表明DkMYB9與DkPDC2存在相互作用。
　　2.聚類分析發(fā)現(xiàn)候選轉(zhuǎn)錄因子DkMYB9與擬南芥MYB家族中具有抑制花青素合成功能的AtMYB3和AtMYB4等聚為一類;氨

3、基酸序列比對分析，結(jié)果顯示候選轉(zhuǎn)錄因子DkMYB9具有R2R3結(jié)構(gòu)域和MYB-bHLH相互結(jié)合基序。不同脫澀類型柿品種中DkMYB9和DkPDC2表達(dá)模式分析，結(jié)果顯示DkMYB9和DkPDC2在不同脫澀類型柿品種中表達(dá)模式相似。
　　3.利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的柿組培苗真空滲透法，瞬時超表達(dá)DkMYB9后，葉片可溶性單寧含量明顯下降;qRT-PCR分析，結(jié)果表明原花青素生物合成途徑相關(guān)基因下調(diào)表達(dá)，而乙醛生物合成途徑相關(guān)基因上調(diào)表達(dá)。<