維拉帕米增強(qiáng)人參皂苷Rg3跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的研究.pdf

1、【目的】研究P-gp抑制劑維拉帕米增強(qiáng)人參皂苷Rg3在Caco-2細(xì)胞模型中跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的作用。
　　【方法】體外培養(yǎng)Caco-2細(xì)胞，通過MTT法確定Rg3和維拉帕米對Caco-2細(xì)胞的無毒性濃度范圍。摸索建立Caco-2細(xì)胞模型的方法、培養(yǎng)條件及完整性評價(jià)方法。建立HPLC檢測Rg3濃度的方法學(xué)。在Caco-2細(xì)胞模型中研究維拉帕米對Rg3跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。
　　【結(jié)果】 MTT法顯示濃度為100μmol/L以下的Rg3及10

2、000μmol/L以下的維拉帕米未顯示明顯細(xì)胞毒性（P＞0.05）。Caco-2細(xì)胞模型培養(yǎng)21-24d，TEER值>500Ω·cm2，苯酚紅通透性實(shí)驗(yàn)Papp＜10-7，考慮Caco-2細(xì)胞模型可以用作藥物轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)。通過色譜掃描確定Rg3檢測波長為203nm，維拉帕米及Hank’s液對檢測沒有干擾。Rg3標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=7108.5C+11542，R2=0.9998，在濃度1-100μmol/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。日內(nèi)精密度、日間精密度

3、均小于4％。長期藥物損失率為4.17%。轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)中，Rg3與Ver聯(lián)合組各組Pratio值分別為1.25、1.28、1.34，Rg3對照組為23.28，Rg3+Ver聯(lián)合組各濃度組和對照組之間差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　【結(jié)論】1、確定了人參皂苷Rg3和維拉帕米對Caco-2細(xì)胞無細(xì)胞毒性的藥物濃度范圍。2、TEER值測定和苯酚紅通透性實(shí)驗(yàn)可評估Caco-2細(xì)胞模型用作藥物跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)的可行性。3、HPLC檢測R