人參皂苷Rg3及其與奧沙利鉑和索拉非尼聯(lián)合誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:通過體外實(shí)驗(yàn)觀察人參皂苷Rg3及其與奧沙利鉑和索拉非尼聯(lián)合對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡的影響,并探討相關(guān)機(jī)制,為中藥與化療藥物及分子靶向藥物的聯(lián)合應(yīng)用提供理論依據(jù)及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
   方法:選擇合適的人參皂苷Rg3、奧沙利鉑和索拉非尼單藥濃度,將單藥、兩藥聯(lián)合及三藥聯(lián)合分別作用于人肝癌細(xì)胞SMMC-7721,采用多種實(shí)驗(yàn)方法觀察其對細(xì)胞株的影響:(1)采用MTT法觀察對SMMC-7721細(xì)胞增殖的影響;(2)流式細(xì)胞術(shù)

2、觀察SMMC-7721細(xì)胞早期凋亡情況;(3)原位末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測SMMC-7721細(xì)胞的中晚期凋亡情況;(4)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(RT-qPCR)、免疫印跡法(Westernblotting)檢測Bax、Bcl-2表達(dá)情況;(5)采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法檢測Bax、Bcl-2、Caspase-3的蛋白表達(dá)情況。
   結(jié)果:(1)人參皂苷Rg3、奧沙利鉑和索拉非尼單藥或聯(lián)合均具有抑制增殖作用,其中三藥對比兩藥、兩藥

3、對比單藥作用更明顯(P<0.01),藥物之間聯(lián)合表現(xiàn)出良好的相加作用;(2)流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn),各實(shí)驗(yàn)組均具有誘導(dǎo)凋亡的作用,三藥組比兩藥組、兩藥組比單藥組具有顯著誘導(dǎo)凋亡作用(P<0.01);(3)原位末端標(biāo)記法顯示,陰性對照組細(xì)胞幾乎無凋亡,細(xì)胞核著淡紫色,陽性對照組細(xì)胞核幾乎全著深褐色,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核固縮著深褐色,單藥及聯(lián)合用藥后凋亡指數(shù)顯著升高(P<0.01);(4)RT-qPCR法檢測發(fā)現(xiàn):除人參皂苷Rg3+索拉非尼兩藥組與人參

4、皂苷Rg3單藥組Bax基因表達(dá)無差異外,其余各實(shí)驗(yàn)組Bax基因表達(dá)均增強(qiáng),且兩藥組較單藥組、三藥組較兩藥組Bax基因表達(dá)均明顯增強(qiáng)(P<0.01或P<0.05);Bcl-2表達(dá)在單藥組、兩藥組及三藥組中具有降低趨勢;Bax/Bcl-2基因比值增高,兩藥組對比單藥組、三藥組對比兩藥組均明顯增高(P<0.01)。(5)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法顯示,Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)及Bax/Bcl-2比值增高,兩藥組對比單藥組、三藥組對比兩藥組均

5、明顯增高(P<0.01或P<0.05);Bcl-2蛋白表達(dá)減弱,兩藥組對比單藥組、三藥組對比兩藥組均明顯降低(P<0.01或P<0.05)。(6)Westernbloting實(shí)驗(yàn)顯示:Bax蛋白表達(dá)及Bax/Bcl-2比值有增高趨勢,兩藥組對比單藥組、三藥組對比兩藥組均具有增高趨勢,Bcl-2蛋白表達(dá)無明顯趨勢。
   結(jié)論:人參皂苷Rg3、奧沙利鉑和索拉非尼單藥或聯(lián)合均具有抑制人肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖以及誘導(dǎo)其凋亡的作

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