復(fù)方苦參注射液及其與奧沙利鉑和恩度聯(lián)合抑制肝癌細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡的研究.pdf

1、目的：通過體外實(shí)驗(yàn)觀察復(fù)方苦參注射液及其與第三代鉑類化療藥物奧沙利鉑和抗腫瘤血管生成藥物重組人血管內(nèi)皮抑制素（恩度）聯(lián)合作用于人肝癌細(xì)胞株的效果，并探討其相關(guān)的作用機(jī)制，為中藥與化療及抗腫瘤血管生成治療聯(lián)合應(yīng)用提供理論依據(jù)。 方法：將不同濃度的復(fù)方苦參注射液、奧沙利鉑、恩度單藥以及聯(lián)合作用于體外培養(yǎng)的人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721，使用不同的技術(shù)檢測細(xì)胞生長狀況：（1）MTT法分析不同濃度和作用時(shí)間的藥物對細(xì)胞增殖的抑制效果；（

2、2）倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；（3）熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)變化特征；（4）流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期的分布改變；（5）原位末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核著色情況；（6）免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Survivin、Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)。 結(jié)果：（1）復(fù)方苦參注射液對肝癌SMMC-7721細(xì)胞有抑制增殖的作用，且該作用具有時(shí)間、劑量依賴性；50μl/ml的復(fù)方苦參注射液與1μg/ml的奧

3、沙利鉑聯(lián)合作用48h后表現(xiàn)出協(xié)同作用，但與恩度聯(lián)合未見明顯增強(qiáng)；（2）光鏡下觀察，藥物作用后細(xì)胞體積變小，逐漸變圓，細(xì)胞間接觸變松；（3）熒光顯微鏡下觀察，細(xì)胞發(fā)生了明顯的早期凋亡和晚期凋亡，聯(lián)合奧沙利鉑組凋亡細(xì)胞比例顯著升高；（4）流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示藥物組G0/G1期細(xì)胞比例升高，S期比例下降，細(xì)胞被阻滯于G0/G1期；（5）原位末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測到藥物作用后，凋亡細(xì)胞的細(xì)胞核被染成深褐色，當(dāng)聯(lián)合奧沙利鉑后凋亡指數(shù)顯著升高，

4、而聯(lián)合恩度未見明顯變化；（6）免疫細(xì)胞化學(xué)法顯示藥物作用后，SMMC-7721細(xì)胞Survivin、Bcl-2蛋白的表達(dá)較對照組減弱（P<0.01），Caspase-3的表達(dá)增高（P<0.01），當(dāng)聯(lián)合奧沙利鉑后，這種作用得到顯著加強(qiáng)（P<0.01），而聯(lián)合恩度未見明顯變化。 結(jié)論：復(fù)方苦參注射液對肝癌SMMC-7721細(xì)胞有抑制增殖的作用，該作用可能是通過將細(xì)胞阻滯于G0/G1期，同時(shí)下調(diào)Survivin、Bcl-2的表達(dá)，上