人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥及聯(lián)合對肝癌細胞PI3K-Akt信號通路影響的實驗研究.pdf

1、目的:
　　通過體外細胞實驗觀察中藥單體人參皂苷Rg3、分子靶向藥物索拉非尼單藥及聯(lián)合對人肝癌SMMC-7721細胞增殖、凋亡、周期及PI3K/Akt信號通路相關(guān)蛋白表達的影響。從分子生物學(xué)水平探討藥物作用機制，為臨床中藥與分子靶向藥物的聯(lián)合使用提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　以人肝癌SMMC-7721細胞株為研究對象，PI3K/Akt通路抑制劑LY294002為陽性對照，具體實驗方法如下:(1)通過MTT法觀察人參皂

2、苷Rg3、索拉非尼、LY294002單藥及不同聯(lián)合方案對SMMC-7721細胞增殖抑制的情況;(2)應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測各組藥物作用后細胞凋亡及周期分布情況;(3)應(yīng)用免疫熒光細胞化學(xué)法和Western blotting法檢測各組藥物作用后SMMC-7721細胞PI3K/Akt信號通路上相關(guān)蛋白(PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt)的表達情況。
　　結(jié)果:
　　(1) MTT法顯示:PI3K/Akt通路抑制劑LY294

3、002單藥可以有效抑制人肝癌SMMC-7721細胞的增殖，并呈時間、劑量依賴性。適宜濃度的人參皂苷Rg3、索拉非尼、LY294002單藥及不同聯(lián)合方案均能有效抑制人肝癌SMMC-7721細胞的增殖，聯(lián)合后兩藥組優(yōu)于單藥組，任兩藥聯(lián)合均表現(xiàn)為一定的相加或協(xié)同作用，但三藥組和索拉非尼聯(lián)合LY294002組差異不顯著（P＞0.05）。
　　(2)流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示:人參皂苷Rg3、索拉非尼、LY294002單藥及不同聯(lián)合方案對人肝癌

4、SMMC-7721細胞均具有誘導(dǎo)凋亡作用，且兩藥組優(yōu)于單藥組，三藥組優(yōu)于兩藥組(P＜0.05)。人參皂苷Rg3和LY294002均主要將人肝癌SMMC-7721細胞阻滯于G1期，含索拉非尼的藥物組主要將細胞阻滯于S期。
　　(3)免疫熒光細胞化學(xué)法、Western blotting法結(jié)果顯示:人參皂苷Rg3、索拉非尼、LY294002單藥均能顯著下調(diào)p-PI3K、p-Akt蛋白的表達，抑制PI3K/Akt通路的磷酸化作用。人參皂苷

5、Rg3聯(lián)合索拉非尼組、索拉非尼聯(lián)合LY294002組對PI3K/Akt通路的抑制作用顯著優(yōu)于單藥組。三藥組對PI3K/Akt通路的抑制作用與索拉非尼聯(lián)合LY294002組比較差異不顯著（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　通過實驗證實人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥及聯(lián)合均能有效抑制人肝癌SMMC-7721細胞的增殖、誘導(dǎo)細胞凋亡、阻滯細胞周期，且兩藥聯(lián)合后作用增強，其作用機制與抑制PI3K/Akt信號通路的磷酸化作用、下調(diào)p-P