丙戊酸鈉對急性T淋巴細胞白血病細胞株Jurkat及骨髓瘤細胞株U266增殖抑制作用及調(diào)控組蛋白乙?;揎椀难芯?pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究丙戊酸鈉(valproic acid sodium,VPA)在體外對Jurkat細胞及U266細胞增殖抑制作用及對細胞周期的影響;觀察VPA對組蛋白去乙?;?(HDAC1)及組蛋白乙?;揎椪{(diào)控的影響,初步探討白血病及骨髓瘤的發(fā)生、發(fā)展與表觀遺傳學之間的聯(lián)系,從而進一步闡明白血病及骨髓瘤發(fā)生、發(fā)展的可能機制。觀察VPA對Jurkat細胞及U266細胞的促凋亡作用及調(diào)節(jié)相關基因的轉(zhuǎn)錄水平,并探討促凋亡的可能途徑。另外進一步研究

2、VPA對原代細胞的增殖抑制作用及調(diào)控組蛋白乙酰化修飾,進而誘導相關基因的重新表達。
   方法:采用CCK-8法檢測VPA對Jurkat細胞及U266細胞增殖的抑制作用;光鏡下觀察細胞增殖及克隆抑制情況;Hoechst33258熒光染色,DNA凝膠電泳觀察細胞凋亡情況;應用流式細胞儀檢測VPA作用前后Jurkat細胞及U266細胞周期及細胞凋亡的變化情況;半定量RT-PCR檢測VPA作用前后Jurkat細胞及U266細胞中組蛋白

3、去乙?;?(HDAC1)、p21waf1/cip1、p27kip1、c-myc、survivinmRNA的表達變化;Western blot方法檢測VPA作用前后HDAC1、組蛋白H3、H4乙?;郊癱aspase-3、caspase-9蛋白的表達情況。同樣應用CCK-8法檢測VPA對原代細胞增殖的抑制作用,用RT-PCR法檢測VPA作用前后原代細胞HDAC1、p21waf1/cip1、p27kip1、c-myc、survivin

4、mRNA表達的變化,用Western blot方法檢測VPA作用前后原代細胞HDAC1、組蛋白H3、H4乙?;鞍姿降淖兓?br>   結(jié)果:(1)VPA對Jurkat細胞及U266細胞的增殖抑制作用呈時間-濃度依賴性;光鏡下觀察可見藥物作用后細胞增殖受抑制及克隆形成抑制。(2)VPA處理Jurkat細胞及U266細胞48h后,細胞周期檢測顯示G0/G1期比例增高,S期比例下降,細胞被阻滯在G0/G1期。(3)與未處理組相比,VP

5、A作用Jurkat細胞及U266細胞48h后HDAC1基因mRNA和蛋白水平表達減弱,而組蛋白H3、H4乙酰化蛋白水平表達增加。(4)與未處理組相比,VPA作用Jurkat細胞及U266細胞48h后Hoechst33258熒光染色可見細胞凋亡增加,細胞核致密濃染;DNA凝膠電泳可見典型的DNA梯形條帶;流式細胞儀檢測細胞凋亡率增加。(5)與未處理組相比,VPA作用Jurkat細胞及U266細胞48h后p21waf1waf1/cip1、p

6、27kip1mRNA的表達增強,而c-myc、survivin mRNA的表達減弱,procaspase-3、procaspase-9蛋白表達也降低。(6)VPA作用原代ALL細胞后,可見細胞增殖生長受抑制,呈時間-濃度依賴性;VPA作用48h后HDAC1基因mRNA和蛋白水平表達減弱,而組蛋白H3、H4乙?;鞍姿奖磉_增加;p21waf1/cip1、p27kip1mRNA的表達增強,而c-myc、survivin mRNA的表達減弱

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