CAG方案清除T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株A3細(xì)胞作用機(jī)制的相關(guān)研究.pdf

1、目的：研究預(yù)激方案(CAG方案)清除T細(xì)胞性急性淋巴細(xì)胞白血病(T-ALL)細(xì)胞株A3細(xì)胞的作用機(jī)制及粒細(xì)胞集落刺激因子及其受體(G-CSF/G-CSFR)配體受體系統(tǒng)在此機(jī)制中所發(fā)揮的作用。 方法： (1)用G-CSFR單克隆抗體標(biāo)記結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)A3細(xì)胞表面G-CSFR的表達(dá)水平。 (2)以A3細(xì)胞為體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，分組分別加入不同濃度的G-CSF(5ng/ml、10ng/ml、15ng/ml、20ng/m

2、l；0ng/ml為對(duì)照組)，培養(yǎng)箱內(nèi)孵育48小時(shí)后收集細(xì)胞，碘化丙啶細(xì)胞核染色，于流式細(xì)胞儀檢測(cè)A3細(xì)胞周期的變化。 (3)以不同濃度的阿糖胞苷(Ara-C)聯(lián)合G-CSF分別作用于A3細(xì)胞48小時(shí)后用Cell Counting Kit(CCK-8)試劑盒檢測(cè)藥物對(duì)．A3細(xì)胞抑制率的影響。 (4)AnnexinV試劑盒結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Ara-C、阿克拉霉素(ACR)及G-CSF聯(lián)合作用48小時(shí)后A3細(xì)胞凋亡水平的變化。

3、 (5)Ras-MAPK通路中MEK的特異性抑制劑PD98059與G-CSF共作用于A3細(xì)胞48小時(shí)后流式細(xì)胞術(shù)分析其對(duì)細(xì)胞周期的影響，CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活力的變化。 結(jié)果： (1)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)得A3細(xì)胞表面G-CSFR表達(dá)率達(dá)94.2％左右，SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析顯示其與陽(yáng)性對(duì)照組急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株(AML)KG-1細(xì)胞之間無(wú)顯著性差異。 (2)G-CSF作甩48h后S期A3細(xì)胞比例在一定濃度范

4、圍內(nèi)隨G-CSF濃度的增加而逐漸升高，在G-CSF濃度為15ng/ml時(shí)達(dá)到最高，且與對(duì)照組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而后隨G-CSF的升高卻逐漸下降。 (3)不同藥物組作用48h后，CCK-8測(cè)得．Ara-C+G-CSF組較單藥Ara-C組抑制AB細(xì)胞生長(zhǎng)更明顯(Ara-C濃度10-5M和10-6M時(shí)P<0.05)。 (4)AnnexinV凋亡試劑盒檢測(cè)．A3細(xì)胞早期凋亡百分率結(jié)果顯示：Ara-C+ACR+G-CSF藥物組

5、細(xì)胞早期凋亡率高達(dá)38％左右，顯著高于Am-C+ACR藥物組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (5)隨著PD98059濃度的逐漸增大，A3細(xì)胞S期細(xì)胞比例及A3細(xì)胞的OD值均逐漸下降，分別在PD98059濃度為40μM～100μM和50μM～100μM時(shí)同對(duì)照組相比差異顯著(p<0.05)。 結(jié)論： (1)T-ALL細(xì)胞株A3細(xì)胞表面可能高表達(dá)G-CSFR。 (2)G-CSF／G-CSFR配體受體系統(tǒng)在CAG方案清

6、除A3細(xì)胞的過(guò)程中，與化療藥物協(xié)同作用，即通過(guò)動(dòng)員G0期細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞增殖周期，增強(qiáng)化療藥物對(duì)細(xì)胞的敏感性從而清除細(xì)胞。 (3)誘導(dǎo)凋亡可能是CAG方案清除T-ALL細(xì)胞株A3細(xì)胞的機(jī)制之一。 (4)G-CSF與效應(yīng)細(xì)胞表面特異性受體(G-CSFR)結(jié)合后，通過(guò)激活一系列下游信號(hào)傳導(dǎo)通路來(lái)發(fā)揮作用，Ras-MAPK途徑是其中之一；PD98059可能通過(guò)特異性抑制Ras-MAPK途徑中MAPK的磷酸化，阻止傳導(dǎo)信號(hào)的下傳從而部分抑制