大黃素衍生物對T淋巴細(xì)胞白血病Molt-4細(xì)胞株及耐阿霉素Molt-4-ADR細(xì)胞株的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：1、研究大黃素衍生物E19和大黃素衍生物E26對人T淋巴細(xì)胞白血病Molt-4細(xì)胞株及耐阿霉素Molt-4/ADR細(xì)胞株的細(xì)胞增殖和凋亡的影響。2、觀察大黃素衍生物E19、E26作用Molt-4及Molt-4/ADR細(xì)胞株后，細(xì)胞增殖、凋亡、耐藥相關(guān)蛋白的變化情況。3、觀察大黃素衍生物E19、E26作用Molt-4及Molt-4/ADR細(xì)胞株后，PI3K/AKT、MAPK信號通路相關(guān)蛋白變化情況。
　　方法：1、細(xì)胞增殖的檢

2、測選用MTT法、細(xì)胞克隆形成實驗。應(yīng)用MTT法觀察藥物作用后細(xì)胞生長曲線的變化情況；觀察藥物作用細(xì)胞后，細(xì)胞克隆數(shù)的增長情況。2、細(xì)胞凋亡的檢測選用DAPI染色法、DNA片段化檢測。觀察藥物作用細(xì)胞后，熒光顯微鏡下染色后的細(xì)胞形態(tài)的變化。觀察藥物作用細(xì)胞后，DNA片段的影像變化。3、藥物作用細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白如bcl-2、procaspase-3、PARP等，耐藥相關(guān)蛋白Pgp，以及PI3K/AKT、MAPK通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化

3、情況，使用蛋白印跡法來檢測。
　　結(jié)果：1、應(yīng)用MTT法可觀察到，選用不同濃度及作用不同時間的大黃素衍生物E19、E26，作用于Molt-4、Molt-4/ADR細(xì)胞，可以顯著抑制細(xì)胞株的增殖，表現(xiàn)為濃度和時間的依賴性。其中，對Molt-4、Molt-4/ADR細(xì)胞，E19的48h的半數(shù)抑制濃度（IC50）分別為1.199±0.204μmol/L和15.60±1.082μmol/L，E26的IC50分別為1.390±0.152μm

4、ol/L和8.564±0.546μmol/L，2、細(xì)胞集落形成實驗可以觀察到，不同濃度大黃素衍生物E19、E26作用Molt-4、Molt-4/ADR細(xì)胞后，隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞集落的形成數(shù)目逐漸減少，有顯著的抑制作用。3、不同濃度大黃素衍生物作用細(xì)胞后，通過DAPI染色法，在熒光顯微鏡下可以觀察到凋亡細(xì)胞的典型形態(tài)改變。4、不同濃度大黃素衍生物作用細(xì)胞后，通過細(xì)胞DNA片段化檢測方法，可以觀察到典型的DNA降解條帶。5、不同濃度大

5、黃素衍生物E19、E26作用Molt-4、Molt-4/ADR細(xì)胞48h后procaspase-8、4EBP1、P70蛋白表達(dá)無明顯變化趨勢，bcl-2、procaspase-3、procaspase-9、PARP、c-myc、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、MAPK、p-MAPK、p-P70、p-4EBP1蛋白表達(dá)較對照組明顯下調(diào)，呈濃度依賴性，耐藥相關(guān)蛋白Pgp在Molt-4/ADR細(xì)胞中表達(dá)，不隨藥物作用濃度而變化。大

6、黃素衍生物E19、E26作用Molt-4、Molt-4/ADR細(xì)胞不同時間后procaspase-8、MAPK、4EBP1、P70蛋白表達(dá)無明顯變化趨勢，bcl-2，c-myc、p-MAPK、p-P70、procaspase-9，procaspase-3、PARP、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、p-4EBP1蛋白表達(dá)較對照組明顯下調(diào)，呈時間依賴性，耐藥相關(guān)蛋白Pgp在Molt-4/ADR細(xì)胞中表達(dá)，不隨藥物作用時間而變化。