結(jié)核分枝桿菌耐藥表型與基因型相關(guān)性及一種新的突變篩查方法的建立.pdf

1、本論文主要包括兩部分內(nèi)容。第一部分對(duì)結(jié)核分枝桿菌耐藥表型與基因型的相關(guān)性進(jìn)行了探討，包括了五種一線抗結(jié)核藥物（異煙肼，利福平，乙胺丁醇，鏈霉素，吡嗪酰胺）和四種二線抗結(jié)核藥物（氧氟沙星，卡那霉素，阿米卡星和卷曲霉素）。第二部分首次提出了一種高分辨熔解結(jié)合非標(biāo)記探針熔解分析進(jìn)行長片段突變篩查的方法，并將該方法應(yīng)用于結(jié)核分枝桿菌吡嗪酰胺耐藥突變的篩查。
　　 第一部分:漫長的診斷時(shí)間嚴(yán)重妨礙了結(jié)核病防控工作的展開，尤其影響了耐藥結(jié)核

2、病人和HIV共感染結(jié)核病人化療方案的快速制定和實(shí)施。病人耐藥情況的快速檢測有利于降低致死率，阻斷病原傳播過程。目前的常規(guī)藥敏試驗(yàn)方法耗時(shí)，耗力，難以在基層醫(yī)療衛(wèi)生單位普及。分子診斷的方法具有快速，準(zhǔn)確，靈敏度高，價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，有望解決目前結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測所面臨的困境。結(jié)核分枝桿菌耐藥主要由相關(guān)基因突變引起。在本研究中我們通過對(duì)比178份臨床菌株的藥敏試驗(yàn)結(jié)果和基因突變情況，研究耐藥表型與基因型的相關(guān)性，試圖發(fā)現(xiàn)具有臨床診斷意義的位

3、點(diǎn)。同時(shí)我們還對(duì)兩種世界衛(wèi)生組織推薦的比例法藥敏試驗(yàn)進(jìn)行了比較。相比于L-J培養(yǎng)基，BECTECTM MGITTM960系統(tǒng)可以在更短時(shí)間內(nèi)提供同樣準(zhǔn)確、靈敏的結(jié)果，但同時(shí)需要高額的支出，并伴隨較高污染率的發(fā)生。我們發(fā)現(xiàn)了不同藥物耐藥相關(guān)的突變位點(diǎn)，這些位點(diǎn)可以用來做藥物耐藥性的分子標(biāo)記。我們得出結(jié)論:雖然分子診斷的方法在結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測上為我們提供一種及時(shí)，準(zhǔn)確，低廉，高效的檢測方式，但還不能取代經(jīng)典的培養(yǎng)法藥敏試驗(yàn)。
　　

4、 第二部分:DNA分子隨著溫度的升高，雙鏈解旋成為單鏈。這是DNA分子本身的一種性質(zhì)，主要與分子的長度和GC含量等相關(guān)。這些熔解和變性特征可以用于臨床研究，基因檢測和法醫(yī)學(xué)。高分辨熔解分析的方法借助雙鏈結(jié)合染料對(duì)這一過程進(jìn)行記錄，使用特殊的軟件對(duì)不同溫度的熒光數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，通過熔解曲線，衍生曲線和差異曲線對(duì)DNA分子的性質(zhì)進(jìn)行研究。我們?cè)O(shè)計(jì)了一種針對(duì)DNA長片段突變篩查的策略。該策略結(jié)合了高分辨熔解分析和非標(biāo)記探針熔解分析的優(yōu)點(diǎn)。我們