結核分枝桿菌耐藥性分析及利福平和氧氟沙星耐藥基因的檢測.pdf

1、目的:調查結核患者中結核分枝桿菌的耐藥性，分析耐藥結核分枝桿菌臨床分離株的rpoB、gyrA和gyrB基因的突變情況，探討一線藥物利福平、二線藥物氧氟沙星的耐藥產(chǎn)生與rpoB基因、gyrA和gyrB基因突變的關系，為結核分枝桿菌(MTB)的耐藥性研究、耐多藥結核病(MDR-TB)和廣泛耐藥結核病(XDR-TB)的診斷與治療提供新的實驗依據(jù)。
　　方法:①收集湖南省胸科醫(yī)院6535例就診的肺結核患者的標本，進行結核分枝桿菌液體培養(yǎng)及

2、絕對濃度法藥物敏感性實驗（簡稱“藥敏實驗”，DST），檢測培養(yǎng)菌株對鏈霉素(SM，S)、異煙肼(INH，H)、利福平(RFP，R)、乙胺丁醇(EMB，E)、卡那霉素(KM，K)和氧氟沙星(OFX，O)6種藥物的敏感性，以結核分枝桿菌標準菌株H37Rv為對照，獲得菌株對6種藥物的耐藥譜。②選取利福平耐藥菌株，用超聲波裂解法提取MTB基因組DNA，對與利福平耐藥相關的rpoB基因進行擴增、測序并比對其突變情況，分析基因突變和耐藥表型的關系。

3、③選取氧氟沙星耐藥菌株，采用超聲波裂解法提取MTB基因組DNA，對與氧氟沙星耐藥相關的gyrA和gyrB基因進行擴增、測序，分析該兩個基因突變與耐藥表型的相關性。
　　結果:①結核分枝桿菌培養(yǎng)陽性1140例，初治患者826例，復治患者314例;耐藥肺結核患者443例，其中耐藥初治患者296例，耐藥復治患者147例，總耐藥率為38.85％(443/1140)，初治患者總耐藥率為35.84％(296/826)，復治患者總耐藥率為46.

4、81％(147/314)。耐多藥患者270例，耐多藥率為23.68％(270/1140)，其中同時耐利福平、異煙肼和鏈霉素在耐多藥模式中所占比例最高，達32.22％(87/270)。而單一耐藥以利福平最高，耐單藥率為28.51％(325/1140)。②本地區(qū)rpoB基因突變以C531T(Ser→Leu)為主，占69.64％(39/56)，其中耐多藥菌株有29株(70.73％)，其次是發(fā)生在RRDR-526位點上的基因突變，占16.07％

5、。③1140株陽性標本中有140株對氧氟沙星耐藥，單耐藥率高達12.28％，是二線藥物中耐藥率最高的一種藥物，而在32株氧氟沙星耐藥的MTB中，所測的gyr基因突變共有25株，且均為gyrA基因突變，其突變率為78.1％(25/32)。gyrA基因突變株中，以94位點較為常見，占gyrA基因突變的60.0％(15/25)，而在gyrB基因上均未發(fā)現(xiàn)突變位點。
　　結論:①某院就診的結核患者的結核分枝桿菌總耐藥率和耐多藥率分別為38