結(jié)核分枝桿菌乙胺丁醇耐藥性與分子特征的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:比較3種以細菌培養(yǎng)為基礎的藥物敏感試驗方法檢測結(jié)核分枝桿菌對乙胺丁醇的藥物敏感性；分析結(jié)核分枝桿菌embCAB基因突變特征及其與乙胺丁醇耐藥的關(guān)聯(lián)性、embCAB突變與乙胺丁醇耐藥水平間的關(guān)聯(lián)性，為建立結(jié)核分枝桿菌乙胺丁醇耐藥的分子檢測新方法提供依據(jù)。
　　方法:（1）采用羅氏培養(yǎng)基比例法（L-J法）、Bactec MGIT960系統(tǒng)檢測法（960法）和微孔板阿爾瑪藍顯色法（MABA）同步對126株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株進行

2、乙胺丁醇藥物敏感性試驗，比較分析3種方法的藥敏試驗結(jié)果；（2）通過溴化十六烷基三甲銨（CTAB）法提取結(jié)核分枝桿菌全基因組脫氧核糖核酸（DNA），采用聚合酶鏈反應（PCR）擴增目的基因片段，基因測序技術(shù)分別對126株試驗菌株的embCAB基因進行測序，分析突變高發(fā)位點與乙胺丁醇耐藥的相關(guān)性；（3）用微孔板Alamar Blue顯色法（MABA法）檢測結(jié)核分枝桿菌對乙胺丁醇最低抑菌濃度（MIC）值，分析embCAB基因突變與EMB耐藥水平

3、的相關(guān)性。
　　結(jié)果:（1）三種方法總體一致率為75.4％。若以L-J法測定結(jié)果為判斷標準，則960法和MABA法的敏感度、特異度和一致率分別為62.8%（49/78）、100.0%（48/48）、77.0%（97/126）和82.1%（64/78）、97.9%（47/48）、88.1%（111/126）；若以960法測定結(jié)果為判斷標準，則L-J法和MABA法的敏感度、特異度和一致率分別為100%（49/49）、62.3%（48/

4、77）、77.0%（97/126）和98.0%（48/49）、77.9%（60/77）、85.7%（108/126），若以MABA法測定耐藥結(jié)果為判斷標準，則L-J法和960法的敏感度、特異度和一致率分別為98.5%（64/65）、77.0%（47/61）、88.1%（111/126）和73.8%（48/65）、98.4%（60/61）、85.7%（108/126）。MABA法與L-J法、960法均有較好一致性而L-J法與960法一致性

5、一般。三種方法的不一致性主要表現(xiàn)在MIC值4.0μg/ml-16.0μg/ml的藥物濃度范圍。（2）在126株結(jié)核分枝桿菌中有78株在embCAB基因有突變發(fā)生，突變率為61.9%，其中，75株菌發(fā)生embB突變，embB306位點突變率最高，16株embA及其上游區(qū)域突變，2株embC有突變。embB306-497突變檢驗結(jié)核分枝桿菌乙胺丁醇耐藥的靈敏度、特異度和一致率分別為79.5%、72.9%和77.0%。（3）14株MIC<5.

6、0μg/ml的菌株中6株發(fā)生embB單突變，菌株MIC值隨embAB聯(lián)合突變率提高而升高。
　　結(jié)論:（1）三種方法對 EMB耐藥檢測一致性良好，MABA法更適合臨床及科研推廣。（2）embB、embA上游非編碼區(qū)突變與EMB耐藥有相關(guān)性，embC突變與EMB耐藥無相關(guān)性，embB306-497更適合作為EMB耐藥檢測的分子標志。聯(lián)合突變比單突變耐藥譜更廣泛，突變率與耐藥種數(shù)呈正相關(guān)，而與北京家族無相關(guān)性。（3）結(jié)核分枝桿菌emb