結(jié)核分枝桿菌耐氨基糖苷類藥物相關(guān)基因突變的研究.pdf

1、結(jié)核分枝桿菌耐藥問題已引起世界廣泛關(guān)注，從對異煙肼、利福平、乙胺丁醇、鏈霉素等一線藥物耐藥，到目前廣泛發(fā)生對二線藥物卡那霉素、阿米卡星等耐藥，產(chǎn)生多重耐藥結(jié)核桿菌（multi-drug resistance tuberculosis，MDR-TB），甚至廣泛耐藥結(jié)核桿菌（extensively drug-resistant tuberculosis，XDR-TB）。結(jié)核分枝桿菌對作為二線主要藥物的氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥機(jī)制為多種修飾酶

2、的產(chǎn)生，以及由16SrRNA介導(dǎo)的藥物作用靶位改變。本研究即選取與耐藥相關(guān)代表酶的編碼基因，以臨床分離耐藥株為研究對象，與結(jié)核分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株H37Rv及臨床分離敏感株進(jìn)行比對，找尋與耐藥相關(guān)的基因突變位點(diǎn)，了解結(jié)核分枝桿菌基因突變對氨基糖苷類抗菌藥物的耐藥作用機(jī)制。結(jié)核分枝桿菌感染宿主后，宿主體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞發(fā)揮主要的細(xì)胞免疫防御功能。T淋巴細(xì)胞相關(guān)指標(biāo)的變化往往與結(jié)核分枝桿菌致病程度、化療效用密切相關(guān)，這種變化在對藥物耐藥與敏感的病人

3、身上是否有所變化，具體的變化情況如何？我們以臨床資料為基礎(chǔ)，進(jìn)行了相關(guān)研究。
　　1、結(jié)核分枝桿菌氨基糖苷抗菌藥物耐藥基因突變研究
　　探討結(jié)核分枝桿菌eis、aac(2')-Ic、tlyA基因突變與氨基糖苷抗菌藥物耐藥之間的相互關(guān)系。我們以已確定耐一線藥物（異煙肼、利福平、乙胺丁醇、鏈霉素）的結(jié)核分枝桿菌臨床分離株為研究對象，應(yīng)用BACTECMGIT960測定其二線藥物（阿米卡星、卡那霉素等）的耐藥情況，同時應(yīng)用基因測序的

4、方法測定結(jié)核分枝桿菌eis、aac(2')-Ic、tlyA基因突變情況，分析基因突變與氨基糖苷抗菌藥物耐藥之間的相互關(guān)系。結(jié)果顯示：
　?、僭诎被擒漳退幍牟糠纸Y(jié)核分枝桿菌中，eis基因487位堿基出現(xiàn)突變，相應(yīng)的163位氨基酸密碼子由CGT突變?yōu)镃AT，即由纈氨酸變?yōu)楫惲涟彼?。eis基因V163I突變（纈氨酸變?yōu)楫惲涟彼幔┛赡芘c結(jié)核分枝桿菌耐氨基糖苷類藥物有關(guān)。
　　②aac(2')-Ic基因沒有發(fā)現(xiàn)突變，仍需要增加樣本的

5、含量或者延長基因測定范圍。
　?、鬯信R床分離菌株tlyA基因33位堿基由A突變?yōu)镚，相應(yīng)的密碼子由CTA突變?yōu)镃TG，均為亮氨酸同義突變，標(biāo)準(zhǔn)菌株H37Rv未見tlyA基因突變，tlyA基因33位堿基突變有可能作為區(qū)分結(jié)核分枝桿菌臨床分離株與標(biāo)準(zhǔn)株的標(biāo)志之一。
　　2、結(jié)核病人T細(xì)胞亞群分析
　　以臨床病人資料為基礎(chǔ)，按照初治、復(fù)治及結(jié)核分枝桿菌耐藥情況進(jìn)行分組，分為初治耐藥組，初治敏感組，復(fù)治耐藥組。采用BACTE

6、CMGIT960系統(tǒng)進(jìn)行藥敏測定；流式細(xì)胞儀檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞絕對值及百分比、CD4+/CD8+值。數(shù)據(jù)全部采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。各組間差異顯著性分析采用多變量方差分析（MANOVA）,以P<0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果顯示T細(xì)胞數(shù)量及亞型、白細(xì)胞（含中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞）數(shù)量在各組之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究由于樣本容量等原因并不能說明T細(xì)胞免疫功能在結(jié)核分枝桿菌耐藥方面的影響及作用