豬繁殖與呼吸綜合征病毒誘導IL-10產(chǎn)生的分子基礎研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的，以仔豬呼吸困難和母豬繁殖障礙為主要特征的一種傳染病。2006年我國爆發(fā)了由HP-PRRSV引起的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。HP-PRRSV與經(jīng)典PRRSV相比致病性和傳播能力更強，引發(fā)機體產(chǎn)生的炎性反應和免疫抑制更嚴重。作為重要的免疫抑制因子與抗炎因子，IL-10在病毒介導的免疫抑制中起重要作用。多個研究結(jié)果顯示PRRSV感染引起的對免疫系統(tǒng)的抑制與IL-1

2、0的表達水平密切相關。目前對PRRSV感染后誘導機體IL-10表達水平上調(diào)機制的研究還不深入，開展PRRSV誘導IL-10產(chǎn)生機制的研究有利于更深入的了解PRRSV感染產(chǎn)生免疫抑制的基礎，為PRRS的防控提供有益的參考。
　　實驗室前期研究顯示:強毒株HuN4及其傳代致弱病毒HuN4-F112體內(nèi)感染豬后，HuN4株能夠誘發(fā)高水平的IL-10表達，而HuN4-F112感染后IL-10表達水平則很低。為研究PRRSV強弱毒感染后誘導

3、IL-10產(chǎn)生的分子基礎，我們首先對PRRSV HuN4株強弱毒體外感染PAM細胞誘導IL-10產(chǎn)生水平進行研究。實驗結(jié)果顯示:HuN4強弱毒感染PAM細胞后，誘導IL-10表達水平存在明顯差異，HuN4感染后誘導高水平的IL-10表達，而HuN4-F112感染后IL-10表達水平很低。對調(diào)節(jié)IL-10產(chǎn)生的通路研究結(jié)果顯示，HuN4強毒感染PAM細胞后與弱毒HuN4-F112相比能夠誘導TLR2與TLR4轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)， TLR7和TL

4、R9轉(zhuǎn)錄水平下調(diào)，TLR3轉(zhuǎn)錄水平則無明顯差異。對TLR下游的重要調(diào)節(jié)因子TRIF和MyD88轉(zhuǎn)錄水平檢測結(jié)果顯示:強毒感染PAM細胞后與弱毒HuN4-F112相比TRIF轉(zhuǎn)錄水平得到上調(diào)，MyD88轉(zhuǎn)錄水平差異不顯著。對ERK與p38研究結(jié)果顯示:強毒HuN4感染PAM細胞后能夠持續(xù)上調(diào)p38磷酸化表達水平，而HuN4與HuN4-F112感染PAM細胞后ERK磷酸化水平無顯著變化。本實驗結(jié)果證實:PRRSV HuN4強弱毒感染PAM細

5、胞后，誘導IL-10表達水平存在明顯差異，強毒顯著高于弱毒。強弱毒感染PAM細胞誘導IL-10表達水平的差異可能是由于強毒通過調(diào)控p38 MAPK磷酸化水平造成的。
　　為了探尋PRRSV基因組上對IL-10表達具有調(diào)控作用的區(qū)域，我們首先利用實驗室之前構(gòu)建的嵌合病毒rHuN4-F5-ORF1a、rHuN4-F5-ORF1b、rHuN4-F5-ORF2-7、rHuN4-F112-ORF1a、rHuN4-F112-ORF1b和rHu

6、N4-F112-ORF2-7在體外感染PAM細胞，結(jié)果顯示PRRSV的非結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)ORF1a以及結(jié)構(gòu)蛋白編碼區(qū)能夠顯著影響IL-10的表達。利用反向遺傳技術，將病毒nsp1、nsp2、nsp9-10和nsp9-11在強弱毒間進行互換，獲得拯救病毒命名為rHuN4-F5-nsp1、rHuN4-F5-nsp2、rHuN4-F5-nsp9-1、rHuN4-F5-nsp9-11、rHuN4-F112-nsp1、rHuN4-F112-nsp2