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1、濕州嚼訾院碩士研究生畢業(yè)(學(xué)位)論文論文題目:anti—CD20一scFv—IgGFc—CD28一e及anti—CD20scFvIgGFc轉(zhuǎn)染人T淋巴細(xì)胞對(duì)Daudi細(xì)胞殺傷作用的比較綜述題目:Rituximab在血液疾病中的治療進(jìn)展研究生姓名:譚映霞學(xué)科專(zhuān)業(yè):臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)學(xué)制:在職申請(qǐng)入學(xué)時(shí)間:2001年9月指導(dǎo)教師:俞康教授單大銘教授吳建波副教授二OO五年五月詁占州醫(yī)學(xué)院砸:學(xué)位恐殳一IgGFcCD28一∈和anti—CD20sc
2、Fv—IgGFc重組子的克隆滴度分別為5X103(CFU/m1),TX103(CFU/m])。兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的NIH3T3細(xì)胞表面的IgO表達(dá)量分別2278%D2536%3分離后的外周血單個(gè)核細(xì)胞,經(jīng)OKT3、IL一2、PEA—L刺激后的T淋巴細(xì)胞比例為951%,病毒上清感染后,經(jīng)G418篩選一周后,H口為我們實(shí)驗(yàn)所得的基因修飾的特異的T淋巴細(xì)胞。其中基因修飾的T細(xì)胞IgG的表達(dá)量均大于20%。4用基因修飾的特異的T淋巴細(xì)胞與相同數(shù)量的D
3、audi細(xì)胞培養(yǎng)厲,用流式細(xì)胞儀榆測(cè)Daudi細(xì)胞AnnexinV的表達(dá),發(fā)現(xiàn)在24小時(shí)內(nèi)有與對(duì)照K562細(xì)胞明顯增高,PO05,而兩種質(zhì)粒介導(dǎo)的T細(xì)胞引起Daudi細(xì)胞AnnexinV的表達(dá)沒(méi)有顯著差異。i用ELISA檢測(cè)24、48、72小時(shí)時(shí)IL2、IFNv的含量,af]ti—CD20一scFv—IgOFc基因修飾的T細(xì)胞與Daudi細(xì)胞共同培養(yǎng)后,與對(duì)照紐相比,IL一2、IFNY無(wú)明顯增加,P005。6與anti—CD20scFv
4、—IgGFc基因修飾的T細(xì)胞相比較,anti—CD20一scFvIgGFcCD28一‘基因修飾的T細(xì)胞殺傷Daudi細(xì)胞后,IL一2和IFNv的表達(dá)有顯著增高,PO。05。結(jié)論:1經(jīng)OKT3、n2、PHA—1刺激后的PBMc能充分激活,能選擇性的T細(xì)胞生長(zhǎng)。逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染激活T淋巴細(xì)胞具有很高轉(zhuǎn)染效率,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)基因修飾的T細(xì)胞表達(dá)重組蛋白可達(dá)20%以上。這與轉(zhuǎn)染的PA317細(xì)胞能產(chǎn)出高滴度的病毒有關(guān)。2含anti—CD20一
5、scFvIggFc—CD28‘和anti—CD20一scFv—IgOFc重組子基因修飾的T細(xì)胞在引起Daudi細(xì)胞早期凋亡無(wú)顯著性差異,說(shuō)明CD28一∈基因修飾可能不影響Daudi細(xì)胞的早期凋亡。_兩種基因修飾的T細(xì)胞在殺傷Daudi細(xì)胞的過(guò)程中,能產(chǎn)生【L一2、[FNY。anti—CD20一scFv—IggFc—CD28一‘基因修飾的T細(xì)胞殺傷Baudi細(xì)胞后,II。一2、IFNY增幅更加明顯,說(shuō)明CD3‘可以刺激T細(xì)胞產(chǎn)生大量的細(xì)胞
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