CD3和CD28雙刺激活化的健康人外周血T淋巴細(xì)胞與胃泌素拮抗劑合用對結(jié)直腸癌細(xì)胞殺傷作用的研究.pdf

1、在腫瘤免疫及基因治療中, 過繼性免疫方法是腫瘤的療法中研究較為廣泛的一種方案。共刺激細(xì)胞對腫瘤的治療是目前研究的熱點(diǎn)。有實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明，共刺激健康人外周血淋巴細(xì)胞對于肝癌、膀胱癌均有一定的殺傷作用。另外，胃泌素是一種重要的胃腸激素，它主要由G 細(xì)胞分泌。G 細(xì)胞是典型的開放型細(xì)胞，以存在于胃竇部最多，其次是胃底、十二指腸和空腸等處。近年發(fā)現(xiàn)，頰粘膜、舌、食道、中樞神經(jīng)系統(tǒng)也含有胃泌素。胃泌素促進(jìn)胃腸道的分泌功能，增加胃腸道的運(yùn)動(dòng)，松馳幽門

2、括約肌，膽道口括約肌和回盲部括約肌，促進(jìn)胃及上部腸道粘膜細(xì)胞的分裂增殖，促進(jìn)胰島素和降鈣素的釋放。胃泌素不僅有刺激腸道上皮增生的能力，且胃泌素及其受體在胃腸腫瘤細(xì)胞生長調(diào)節(jié)中起著重要作用，而胃泌素拮抗劑對結(jié)腸癌的生長及轉(zhuǎn)移具有明顯抑制作用。本研究主要在體外聯(lián)合應(yīng)用胃泌素拮抗劑和CD3/ CD28 刺激外周血T 淋巴細(xì)胞，對活化細(xì)胞在體外對結(jié)腸癌細(xì)胞的影響及殺傷途徑進(jìn)行初步的研究。 目的: 探討聯(lián)合應(yīng)用胃泌素拮抗劑和CD3

3、/ CD28 單克隆抗體共刺激活化健康人外周血T 淋巴細(xì)胞在體外對結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29 的影響及殺傷作用。 方法: 外周血T 淋巴細(xì)胞的分離與體外培養(yǎng)；用含CD3/ CD28 單抗共刺激活化的外周血T 淋巴細(xì)胞或（和）CI-988（胃泌素拮抗劑）的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)靶細(xì)胞（結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29）； MTT 法獲得生長曲線，檢測活化細(xì)胞的體外淋巴細(xì)胞毒作用。電鏡觀察效應(yīng)細(xì)胞殺傷的結(jié)腸癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)并用流式細(xì)胞儀

4、檢測結(jié)腸癌細(xì)胞的相關(guān)凋亡情況。 結(jié)果: 用CD3/CD28 單抗共刺激活化的T 細(xì)胞與靶細(xì)胞共同培養(yǎng)2 天后效應(yīng)細(xì)胞對結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29 殺傷率可達(dá)60.4％。而加用胃泌素拮抗劑處理殺傷率達(dá)89.5％。較單用CD3/CD28 單抗共刺激細(xì)胞處理殺傷作用明顯提高（P <0．01）。流式細(xì)胞儀檢測靶細(xì)胞HT-29 細(xì)胞12 小時(shí)顯示凋亡。共刺激細(xì)胞、CI-988 二者合用與腫瘤細(xì)胞共同培養(yǎng)72 小時(shí)后，電鏡下可見壞死及凋