人結(jié)直腸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞和結(jié)腸正常成纖維細(xì)胞對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞EMT的影響及機(jī)制.pdf

1、結(jié)直腸癌是消化系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，據(jù)世界癌癥協(xié)會(huì)2015年的研究表明，結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率仍然高居第三位。雖然針對(duì)結(jié)直腸癌的化學(xué)治療和靶向治療已經(jīng)取得了顯著進(jìn)展，但是仍有60％的手術(shù)后病人會(huì)發(fā)生原位復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此，只有徹底地弄清結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移的機(jī)制，才能為結(jié)直腸癌的治療提供新方案。
　　腫瘤微環(huán)境不僅為腫瘤的生長(zhǎng)提供了充足的營(yíng)養(yǎng)，而且它可以通過(guò)一些信號(hào)通路調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。其中癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)是腫

2、瘤微環(huán)境的主要成分，它在結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中扮演了重要角色。相比于正常的成纖維細(xì)胞(NFs)，CAFs中33個(gè)基因高甲基化，26個(gè)基因低甲基化，其表達(dá)更高水平的FAP、α-SMA和POSTN等等。目前CAFs到底是通過(guò)何種機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移尚不完全清楚。Wnt/β-catenin信號(hào)通路的異常激活在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中起了重要作用，那么CAFs是不是通過(guò)調(diào)控Wnt/β-catenin信號(hào)通路發(fā)揮促腫瘤轉(zhuǎn)移的作用？既然NFs和CAFs

3、細(xì)胞基因存在差異，那么NFs對(duì)腫瘤細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路和其生物學(xué)行為又會(huì)產(chǎn)生何種影響？本研究將進(jìn)行初步探討。
　　首先，我們采用組織塊植入法，從人結(jié)直腸癌患者的腫瘤組織中分離純化CAFs，從正常切緣處分離純化NFs，借助Western Blot和免疫熒光方法進(jìn)行鑒定。其次，通過(guò)免疫熒光、Q-PCR和SA-β-gal染色方法檢測(cè)細(xì)胞活化和衰老程度，結(jié)果表明CAFs的活化和衰老程度均要高于NFs。接下來(lái)，我們將CAF

4、s與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)，上皮標(biāo)記E-Cadherin下調(diào)，間質(zhì)標(biāo)記Vimentin和Fibronectin上調(diào)，即促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT);同時(shí)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)因子S552和DVL3的水平上調(diào)，表明腫瘤細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路活化。用NFs上清條件培養(yǎng)結(jié)直腸癌細(xì)胞或NFs與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力下降，E-Cadherin上調(diào)，N-Cadherin下調(diào)

5、，即NFs抑制腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT;同時(shí)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)因子β-catenin和DVL2的表達(dá)水平下調(diào)，Wnt/β-catenin信號(hào)受抑制。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，NFs促進(jìn)腫瘤細(xì)胞Wnt5a表達(dá)，同時(shí)Wnt/Ca2+通路活化。
　　通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)，我們得到以下結(jié)論:
　　1.人結(jié)直腸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞活化和衰老程度高于結(jié)腸正常成纖維細(xì)胞;
　　2.人結(jié)直腸癌相關(guān)成纖維細(xì)胞促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞EMT、遷移和Wnt