抗CD3ε單克隆抗體和5-氟尿嘧啶對(duì)T淋巴細(xì)胞凋亡的協(xié)同作用.pdf

1、該研究首先發(fā)現(xiàn)采用預(yù)包被抗CD8抗體對(duì)JK、TJK和T3JK細(xì)胞進(jìn)行34小時(shí)刺激后,僅有TJK細(xì)胞出現(xiàn)凋亡,使胞內(nèi)caspase-3由未活化的形式生成活化的小片段,并有底物催化活性;伴隨TJK的細(xì)胞凋亡,其p53的表達(dá)顯著升高,而JK、T3JK細(xì)胞中則保持很低的水平,首次證明p53參與了TCR/CD3介導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞凋亡信號(hào)途徑的調(diào)節(jié);同時(shí)發(fā)現(xiàn)Bcl-2蛋白家族成員Bid在抗CD8抗體刺激的TJK細(xì)胞凋亡時(shí)被活化,形成截短的tBid(t

2、runcated Bid),這種現(xiàn)象的發(fā)生一般和線粒體途徑相關(guān),因此該實(shí)驗(yàn)提示Bcl-2蛋白家族和線粒體可能參與了TCR/CD3介導(dǎo)的T淋巴白血病細(xì)胞凋亡的信號(hào)傳遞.由于TJK細(xì)胞中CD3ε-ITAM是完整的,JK、T3JK細(xì)胞中CD3ε-ITAM發(fā)生了突變,表明上述結(jié)果與CD3ε-ITAM的完整性相關(guān),CD3ε-ITAM中的兩個(gè)酪氨酸在TCRP/CD3介導(dǎo)的信號(hào)傳遞中起關(guān)鍵作用,為進(jìn)一步研究TCR/CD3復(fù)合物介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑及分子

3、機(jī)制奠定了基礎(chǔ).該研究首次發(fā)現(xiàn)抗CD8單克隆抗體和5-氟尿嘧啶在刺激T淋巴白血病細(xì)胞凋亡時(shí)出現(xiàn)相似的細(xì)胞內(nèi)效應(yīng),有相同的蛋白因子參與,提示二者在引起T淋巴白血病細(xì)胞凋亡的過(guò)程中可能具有協(xié)同作用,這一工作假設(shè)得到了進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)支持.我們將二者聯(lián)用刺激上述3株T淋巴白血病細(xì)胞株,結(jié)果表明二者聯(lián)用比單獨(dú)使用抗CD8抗體或5-FU時(shí),細(xì)胞凋亡率、p53和NFκB表達(dá)、caspase-3和Bid活化等均顯著提高;使用caspase全抑制劑、cas

4、pase-3抑制劑、caspase-8抑制劑和caspase-9抑制劑都可以抑制抗CD8單體和5-氟尿嘧啶聯(lián)用引起的細(xì)胞凋亡,使細(xì)胞存活率增加,說(shuō)明除了caspase-3外,caspase-8,-9等也參與了此凋亡信號(hào)傳遞途徑.該項(xiàng)研究表明抗CD8單克隆抗體和5-氟尿嘧啶在誘導(dǎo)T淋巴白血病細(xì)胞凋亡時(shí)具有協(xié)同作用,TCR/CD3抗原受體復(fù)合物介導(dǎo)的信號(hào)途徑與化學(xué)藥物介導(dǎo)的信號(hào)途徑中存在交叉點(diǎn)(Cross Talk)或共同通路,在理論上為進(jìn)