5-氟尿嘧啶和放射線聯(lián)合應(yīng)用對人宮頸腺癌Hela細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一。其傳統(tǒng)治療主要以手術(shù)和放療為主，可使部分患者得到根治或緩解。近年宮頸腺癌發(fā)病有逐漸增加趨勢，且宮頸腺癌單純手術(shù)或放療后易短期內(nèi)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，對化療亦不敏感，故預(yù)后不良。因此為改善預(yù)后，臨床迫切需要探討對宮頸腺癌更為有效的方法。近年來報道新輔助化療(即術(shù)前或放療前的化療)和同步放化療等一些新的治療手段，可減少病灶的體積，消除亞臨床轉(zhuǎn)移，提高手術(shù)或/和放療的效果。故目前化療與放療的聯(lián)合已成為腫瘤治療方面的

2、研究重點。5—氟尿嘧啶(5—Fu)被廣泛應(yīng)用于多種惡性腫瘤的治療，也是宮頸癌新輔助化療的常用藥物之一，并且還有一定的放射增敏效果。本實驗從凋亡角度入手，應(yīng)用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡等方法，研究了5—氟尿嘧啶(5—Fu)和放射線聯(lián)合應(yīng)用對人宮頸腺癌Hela細(xì)胞凋亡的影響。 方法：人宮頸腺癌Hela細(xì)胞株單層貼壁培養(yǎng)于1640培養(yǎng)液中，放37℃、飽和濕度、5％ CO2的培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(lán)法檢測不同濃度的5—

3、Fu對人宮頸腺癌Hela細(xì)胞的增殖抑制情況，篩選出5—Fu作用Hela細(xì)胞48小時的IC50。取對數(shù)生長期人宮頸腺癌Hela細(xì)胞，按1×106個/ml將單細(xì)胞懸液2ml接種至6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24小時。將細(xì)胞隨機分為空白對照組，單純化療組(單純5—Fu組)，單純放療組(單純放射線組)及放化療聯(lián)合組(5—Fu和放射線聯(lián)合應(yīng)用組)4大組?？瞻讓φ战M不進行任何處理，單純化療組用通過MTT法得到的5—Fu對宮頸腺癌Hela細(xì)胞的IC50及大

4、于IC50濃度的5—Fu分別處理Hela細(xì)胞，單純放療組按X線照射的不同劑量分成2 Gy，4 Gy，6 Gy放射組。5—Fu和放射線聯(lián)合組先進行放射線的照射分別為2 Gy、4 Gy、6 Gy三個劑量，照射后根據(jù)分組情況馬上加入不同濃度的5—Fu。繼續(xù)培養(yǎng)24及48小時后，離心收獲細(xì)胞。以磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌后，采用異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白(Annexin V)和碘化丙啶(PI)染色，置于流式細(xì)胞儀