硼替佐米聯(lián)合5-氟尿嘧啶對Hela細胞的抑制作用及其機制的研究.pdf

1、目的:宮頸癌為大家所熟知，也是目前所知的婦科最為常見的惡性腫瘤，每年全球都約有二十幾萬的婦女以為此而去世，宮頸癌對婦女的身心健康和生存品質(zhì)都有著嚴重的負面影響，給許多家庭帶來了巨大的經(jīng)濟負擔。宮頸癌一般的治療手段主要是以手術(shù)和放化療，這些手段可以使一部分病患得到根治或著相對的緩解病情，但大多數(shù)的病患經(jīng)過手術(shù)或者放化療措施后的遠期預(yù)后并非特別理想，且部分人群對化療又不是很敏感，甚至產(chǎn)生抵抗，故預(yù)后不良。因此為了全人類的健康及生存環(huán)境，迫切

2、需要尋找對宮頸癌較為有效的方法從而大大改善宮頸癌患者的預(yù)后。硼替佐米(Bortezomib)是一種細胞內(nèi)蛋白酶體抑制劑的抑制劑，人體細胞內(nèi)的蛋白酶體的糜蛋白酶樣活性和胰蛋白酶樣活性這兩者都可以受到Bortezomib的抑制作用。5-FU脫氧核苷酸，5-FU核苷等代謝產(chǎn)物可以由5-氟尿嘧啶(5-FU)在人體細胞內(nèi)轉(zhuǎn)化而成，這些物質(zhì)由于和DNA及蛋白質(zhì)的合成所需底物相似，從而影響或干擾細胞內(nèi)正常的代謝過程，故5-FU作為一種通過影響細胞代謝

3、而抗腫瘤的藥物，在臨床惡性腫瘤的治療方面已被廣泛地采用，本文主要探討的是Bortezomib這一血液腫瘤常用的化療藥物和常見的臨床腫瘤化療藥物5-氟尿嘧啶（5-FU）對于Hela細胞的作用是怎樣的，并淺表分析其作用機制。
　　方法:將人的宮頸腺癌Hela細胞培養(yǎng)于培養(yǎng)瓶中，呈單層貼壁樣生長，培養(yǎng)基為含10％新生牛血清的DMEM-H（高糖）完全培養(yǎng)基，并將培養(yǎng)瓶放置于擁有飽和的濕度、溫度為37攝氏度、含5％二氧化碳環(huán)境適合人類細胞生

4、存的培養(yǎng)箱中進行傳代培養(yǎng)。分為空白對照組，單純Bortezomib組，單純5-FU組及聯(lián)合組(Bortezomib和5-FU聯(lián)合應(yīng)用組)4大組。并通過MTT法來測定各個組別的細胞抑制率情況。采用RT-PCR法測定不同組別中hela細胞的Bcl-2、Survivn、IGF-1及HIF-1αmRNA的表達;PI標記流式細胞術(shù)(FCM)分析不同組別的細胞周期、AnnexinⅤ/PI雙染法法測定不同組別的凋亡的變化。
　　結(jié)果:(1)MT

5、T檢測法的檢測結(jié)果顯示，Bortezomib及5-FU單獨使用時均可抑制Hela細胞的增殖，且抑制作用與作用的時間及濃度呈正相關(guān)，兩者聯(lián)合作用后抑制增殖作用更顯著(P＜0.05);(2)RT-PCR結(jié)果顯示Bortezomib及5-FU均可使BCL-2、IGFmRNA及SurvivnmRNA的表達下降，且與藥物濃度呈正比，并且聯(lián)合化療組較單獨化療組的抑制作用更為顯著(P＜0.05);Bortezomib及5-FU對HIF1αmRNA表達

6、無抑制作用，但兩者聯(lián)合應(yīng)用后其表達量較對照組顯著降低(P＜0.05)。(3)細胞周期結(jié)果顯示Bortezomib及5-FU可影響Hela細胞的周期比例發(fā)生變化，使其處于S期的細胞比例減少，聯(lián)合化療組較單獨化療組更加顯著(P＜0.05)。(4)凋亡結(jié)果顯示Bortezomib和5-FU單獨使用時均可引誘導Hela細胞發(fā)生凋亡，聯(lián)合化療組誘導凋亡的作用較單獨化療組效果更加顯著(P＜0.05)。
　　結(jié)論:本實驗結(jié)果表明，Bortezo