硼替佐米對小鼠H22肝癌的抑制作用及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分硼替佐米對小鼠H22肝癌的抑制作用及其機(jī)制研究
　　目的:通過觀察硼替佐米(Bortezomib)對小鼠肝癌肝癌細(xì)胞H22皮下移植瘤的生長抑制作用,初步探討其作用機(jī)制。
　　方法:皮下注射H22細(xì)胞建立小鼠腫瘤模型后,尾靜脈注射Bortezomib隔三天給藥一次,共給藥四次,觀察腫瘤生長情況,同時(shí)稱重、測量皮下移植瘤大小,給藥結(jié)束后一周,處死小鼠,解剖小鼠取皮下移植瘤做免疫組化,觀察腫瘤細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)。

2、>　　結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤體積與對照組相比存在顯著性差異(P<0.05);實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤體積/小鼠體重較對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05);免疫組化示:給藥組促凋亡蛋白 TNF-α的表達(dá)明顯高于生理鹽水對照組,而凋亡抑制蛋白(XIAP、SURVIVIN、STAT3)的表達(dá)則明顯降低(P<0.05)。
　　結(jié)論:蛋白酶體抑制劑Bortezomib可明顯抑制H22皮下移植瘤的生長;給藥組皮下移植瘤促凋亡蛋白表達(dá)較生理鹽水對照組增加,抑

3、凋亡蛋白表達(dá)減少,提示Bortezomib抑制H22肝癌腫瘤生長可能是通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的,說明它有可能成為治療肝癌的新的分子靶向藥物。具體研究機(jī)制值得我們進(jìn)一步深入研究。
　　第二部分 GFP及ISG15質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞株及表達(dá)研究
　　目的:篩選出穩(wěn)定表達(dá)GFP綠色熒光的肝癌細(xì)胞株及研究ISG15質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染表達(dá)
　　方法:用脂質(zhì)體Lipofectamine? LTX將pcDNA3.1-GFP和PcDNA4.

4、0-ISG15質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株MHCC97H,MHCC97L。用G418篩選穩(wěn)定表達(dá)GFP綠色熒光的肝癌細(xì)胞株;Western Blotting檢測ISG15表達(dá)水平。
　　結(jié)果:將PcDNA3.1-GFP質(zhì)粒及PcDNA4.0-ISG15質(zhì)粒轉(zhuǎn)入肝癌細(xì)胞后,熒光顯微鏡拍照及Western Blotting提示轉(zhuǎn)染成功,G418篩選帶熒光肝癌細(xì)胞株的最佳藥物維持濃度為為400微克/毫升。最終發(fā)現(xiàn)ISG15轉(zhuǎn)染前后表達(dá)差異顯著