銀杏酚誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡及對(duì)荷H22小鼠實(shí)體瘤生長(zhǎng)的抑制作用.pdf

1、銀杏是一種彌足珍貴的具有良好保健功效的藥食兩用植物，銀杏酚酸是銀杏中具有顯著抗腫瘤作用的生物活性成分之一。但目前關(guān)于銀杏酚酸的抗腫瘤活性研究?jī)H局限于對(duì)銀杏酸的研究，而對(duì)銀杏酚的生物活性研究，尤其是銀杏酚的抗腫瘤作用機(jī)理，目前國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道。本文通過(guò)銀杏酸脫羧得到銀杏酚，研究銀杏酚體外對(duì)SMMC-7721人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，并初步探討其抑制機(jī)理;通過(guò)建立小鼠荷肝癌實(shí)體瘤H22模型，研究銀杏酚體內(nèi)用藥對(duì)H22實(shí)體瘤的抑制作用，

2、研究從三方面進(jìn)行，主要結(jié)果如下:
　　 1、銀杏酚同系物及銀杏酚C17(:)1單體體外對(duì)SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的研究。
　　 采用MTT法，分別從時(shí)效和量效兩個(gè)方面檢測(cè)銀杏酚同系物及銀杏酚C17(:)1單體對(duì)SMMC-7721細(xì)胞存活率的影響，并分別計(jì)算銀杏酚同系物和銀杏酚C17(:)1單體的半數(shù)抑制濃度IC50;然后研究5-FU與銀杏酚同系物聯(lián)合用藥抑制SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。試驗(yàn)結(jié)果表明，在0～

3、400μg/mL的劑量范圍內(nèi)，銀杏酚同系物對(duì)SMMC-7721細(xì)胞呈現(xiàn)一個(gè)倒“U”型影響趨勢(shì)。當(dāng)濃度在0-100μg/mL范圍內(nèi)時(shí)呈現(xiàn)明顯的量效正相依賴關(guān)系，在100-200μg/mL范圍內(nèi)時(shí)銀杏酚對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的抑制作用基本不變，但是當(dāng)濃度在200μg/mL以上時(shí)，銀杏酚對(duì)SMMC-7721細(xì)胞的抑制率反而下降。在0～30μg/mL的劑量范圍內(nèi)，銀杏酚C17(:)1單體分別作用SMMC-7721細(xì)胞24h、48h和72h的I

4、C50分別為(15.33±1.19)μg/mL,(12.20±1.09)μg/mL和(10.88±1.03)μg/mL。當(dāng)銀杏酚同系物與5-FU按照1∶1和2∶1的比例聯(lián)合作用SMMC-7721細(xì)胞時(shí)，均表現(xiàn)為拮抗作用，藥物聯(lián)合指數(shù)I分別為1.53和1.12;但是當(dāng)銀杏酚與5-FU按照4∶1比例聯(lián)合作用于SMMC-7721細(xì)胞時(shí)，二者表現(xiàn)為協(xié)同抑制SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)作用，藥物聯(lián)合指數(shù)I為0.93。其次，用10μg/mL濃度銀杏酚

5、C17(:)1單體連續(xù)培養(yǎng)SMMC-7721細(xì)胞十代，顯微鏡觀察各代細(xì)胞形態(tài)變化。結(jié)果表明銀杏酚C17(:)1單體對(duì)細(xì)胞形態(tài)影響較小。
　　 2、銀杏酚C17(:)1單體體外抑制SMMC-7721細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制探究。
　　 采用Ho.33342/PI雙熒光染色法觀察10μg/mL和20μg/mL的銀杏酚C17(:)1單體作用SMMC-7721細(xì)胞12h和24h后細(xì)胞核的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)SMMC-7721細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞凋亡特征

6、的細(xì)胞核濃縮以及凋亡小體現(xiàn)象。采用Westernblot法檢測(cè)5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL濃度的銀杏酚C17:1單體對(duì)SMMC-7721細(xì)胞凋亡蛋白Bax/Bcl-2表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)促凋亡蛋白Bax相對(duì)抑凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)增強(qiáng)。分別用瓊脂糖電泳法和Caspase-3檢測(cè)法檢測(cè)濃度為10μg/mL和20μg/mL的銀杏酚C17(:)1單體對(duì)SMMC-7721細(xì)胞DNA和Caspase-3的影響。實(shí)驗(yàn)

7、結(jié)果顯示caspase-3表達(dá)增強(qiáng)，但是未見(jiàn)DNALadder出現(xiàn)。
　　 3、銀杏酚同系物體內(nèi)對(duì)小鼠肝癌H22實(shí)體瘤的影響。
　　 昆明小鼠腹腔傳代建立小鼠肝癌H22實(shí)體瘤模型，分別以20、40、80、160mg/Kg劑量的銀杏酚同系物連續(xù)腹腔給藥7d，于末次給藥后24h，眼球取血后脫頸處死小鼠，剝離瘤體，分別摘取脾臟、胸腺，計(jì)算抑瘤率、脾指數(shù)和胸腺指數(shù)，并做血常規(guī)檢測(cè)。結(jié)果顯示40、80、160mg/Kg劑量組銀杏酚