維生素D類似物EB1089對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721生長(zhǎng)抑制作用的研究.pdf

1、研究背景：
　　原發(fā)性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)在全球范圍內(nèi)惡性腫瘤的發(fā)病率位于第五位,位于全球惡性腫瘤致死率第二位。目前肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC,簡(jiǎn)稱肝癌)是全球原發(fā)性肝癌病人中最為常見(jiàn)的病理類型,所占比例大約為70％到85%。盡管肝癌的研究已經(jīng)進(jìn)行多年,但目前仍未完全闡明其病因和分子生物學(xué)機(jī)制。時(shí)至今日,仍然沒(méi)有特別有效的治療肝癌的方法,肝癌患者

2、的整體預(yù)后情況不容樂(lè)觀。因此,對(duì)導(dǎo)致HCC發(fā)生發(fā)展的的分子生物學(xué)機(jī)制進(jìn)行深入研究,對(duì)于提高HCC診斷及治療水平具有十分重大的意義。
　　大量研究結(jié)果表明,維生素D可能對(duì)肝癌有抑制作用,但研究結(jié)果并不完全一致。目前主要認(rèn)為維生素D可能通過(guò)抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞分化、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等方式發(fā)揮其保護(hù)作用,但確切機(jī)制仍然不明。探討維生素D保護(hù)機(jī)制并進(jìn)一步闡明其與肝癌發(fā)病關(guān)系,對(duì)于對(duì)改善肝癌患者的長(zhǎng)期生存率有著非常積極的意義制定肝癌相關(guān)預(yù)防策

3、略和措施具有重要意義。
　　脂肪酸輔酶A連接酶(fatty-acid-CoA ligase,FACL)屬于酰基輔酶A連接酶家族,是控制游離脂肪酸(free fatty acid,FFA)的關(guān)鍵酶,它可以通過(guò)催化細(xì)胞內(nèi)游離脂肪酸細(xì)胞轉(zhuǎn)化為脂肪酸?；o酶A(acyl-CoAs)這一方式影響脂肪酸的代謝。根據(jù)它的基質(zhì)特異性和在不同組織的分布,在人體中含有5種亞型:FACL1,3,4,5和6。近年來(lái)越來(lái)越多的研究表明FACL在多種惡性腫瘤

4、中呈現(xiàn)高表達(dá)。最近研究發(fā)現(xiàn)維生素D及其類似物可以通過(guò)影響前列腺癌內(nèi)FACL的表達(dá)來(lái)抑制腫瘤的生長(zhǎng)增殖。
　　然而,維生素D會(huì)引起人體血鈣濃度上升這一副作用限制了其在臨床上用于抗腫瘤的治療。EB1089是一種維生素D類似物,在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、分化反面有著更好的效果,而不會(huì)引起明顯的血鈣上升。本研究旨在通過(guò)研究維生素D類似物EB1089對(duì)肝癌細(xì)胞體外和體內(nèi)生長(zhǎng)環(huán)境下的抑制作用和其是否影響肝癌內(nèi)FACL3、FACL4、FACL5和ER

5、的水平,探討其抗腫瘤作用的可能機(jī)制。
　　方法與結(jié)果：
　　1.體外培養(yǎng)肝癌SMMC-7721細(xì)胞株,以1、10、100、1000nmol/L的EB1089分別作用24、48和72h,采用MTT法測(cè)定EB1089對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖的影響,結(jié)果顯示,EB1089可以有效的抑制SMMC-7721細(xì)胞的生長(zhǎng),各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,呈現(xiàn)出時(shí)間和劑量依賴性。
　　2.用1000nmol/L濃度的EB1089作用SMMC細(xì)胞24h

6、和48h后,采用RT-PCR方法分別檢測(cè)SMMC-7721細(xì)胞中FACL3、FACL4、FACL5和ERmRNA的表達(dá)變化。結(jié)果顯示,EB1089作用24h和48h后,SMMC-7721細(xì)胞的FACL4和FACL5mRNA表達(dá)下降,ERmRNA表達(dá)上升,并呈時(shí)間依賴關(guān)系;而FACL3mRNA表達(dá)無(wú)明顯改變。
　　3.用1000nmol/L濃度的EB1089作用SMMC細(xì)胞24h和48h后,采用Western-blot方法分別檢測(cè)S

7、MMC-7721細(xì)胞中FACL4、FACL5和ER蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果顯示,EB1089作用24h和48h后,SMMC-7721細(xì)胞的FACL4和FACL5蛋白表達(dá)均下降,ER蛋白表達(dá)上升,并呈時(shí)間依賴關(guān)系。
　　4.將肝癌SMMC-7721細(xì)胞懸液皮下注射于BALB/cNU/Nu裸鼠,建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,隨機(jī)分組后實(shí)驗(yàn)組分別給予0.5和1.0μg/(kg·d)腹腔注射,對(duì)照組給予等量乙醇溶液,不處死裸鼠情況下每5天計(jì)量