anti-CD20scFv-IgGFc-CD80-CD28-ζ及anti-CD20scFv-IgGFc-CD80轉(zhuǎn)染人T淋巴細(xì)胞對(duì)原代CLL細(xì)胞殺傷作用的比較.pdf

1、將本室已經(jīng)成功構(gòu)建的含anti-CD20scFv/IgG Fc/CD80片段的PLNCX質(zhì)粒和anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ片段的PLNCx質(zhì)粒,分別轉(zhuǎn)染入正常人外周血T淋巴細(xì)胞中,并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)比較兩種不同的細(xì)胞特異性對(duì)CD20陽(yáng)性的原代慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)細(xì)胞的殺傷及誘導(dǎo)分泌IL-2和IFN-γ能力的差異,從而尋找一種新的基因治療途徑,用于CD20陽(yáng)性的惡性淋巴瘤的生物治療方案. 方法

2、： 1.穩(wěn)定轉(zhuǎn)染原代T淋巴細(xì)胞:將兩種質(zhì)粒分別通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染入逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝的PA317細(xì)胞中,把包裝好的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染T淋巴細(xì)胞,經(jīng)G418(600μg/ml)篩選一周獲得兩種穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的T淋巴細(xì)胞. 2. 比較兩種穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的T細(xì)胞對(duì)CD20陽(yáng)性的原代CLL細(xì)胞的殺傷作用:把轉(zhuǎn)染的兩種不同的T細(xì)胞與CD20陽(yáng)性的原代CLL細(xì)胞在體外分別共同培養(yǎng),在顯微鏡下觀察CD20陽(yáng)性的原代CLL細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),檢測(cè)轉(zhuǎn)染T細(xì)胞激活情況包

3、括ELISA法測(cè)共同培養(yǎng)的上清液中IL-2、γ-IFN等細(xì)胞因子水平,并比較其差異. 結(jié)果： 1.包裝的含目的基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染T淋巴細(xì)胞后經(jīng)G418(600 μg/ml)篩選一周,獲得大量穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的原代T淋巴細(xì)胞,即為我們實(shí)驗(yàn)所得的基因修飾的特異的T淋巴細(xì)胞. 2. 兩種穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的T細(xì)胞分別與CD20陽(yáng)性的原代CLL細(xì)胞在體外共同培養(yǎng)后,在顯微鏡下觀察CD20陽(yáng)性的原代CLL細(xì)胞碎片增加,數(shù)量明顯減少,培養(yǎng)上

4、清液中IIJ-2和γ-IFN水平與對(duì)照組相比明顯升高(P<0.01),且兩種不同的轉(zhuǎn)染細(xì)胞的上清液中IL-2和γ-IFN水平結(jié)果不同 (P<0.01). 結(jié)論： 1.通過(guò)細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法 anti-CD20scFv/IgGFc/CD80 及anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ嵌合錨定T細(xì)胞能夠成功構(gòu)建.用流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)基因修飾的T細(xì)胞表達(dá)重組蛋白可達(dá)20﹪以上. 2.anti-CD20

5、scFv/IgGFc/CD80及anti-CD20scFv/IgGFc/C;D80/CD28/ζ嵌合錨定T細(xì)胞能夠在體外有效地特異性殺傷CD20陽(yáng)性的原代CLL細(xì)胞,均能誘導(dǎo)IL-2、IFN-γ的顯著增高. 3.與anti-CI)20scFv/IgGFc/CD80基因修飾的T細(xì)胞相比,anti-CD20scFv/IgGFc/CD80/CD28/ζ基因修飾的T細(xì)胞殺傷原代CLL細(xì)胞后,IL-2和IFN Y的表達(dá)有顯著增高,P<0.