HCMV感染對HEL細胞MCM裝載因子Cdc6與Cdt1的影響.pdf

1、目的 研究人類巨細胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染對人胚肺成纖維(human embryonic lung fibroblastic,HEL)細胞的MCM裝載因子Cdc6與Cdt1表達的影響，從分子水平上探討HCMV的發(fā)病機制。 方法 用血清饑餓法同步化HEL，細胞于G<,0>/G<,1>期，流式細胞術(shù)測細胞周期；用HCMV感染同步化的HEL細胞作為感染組，同時設(shè)模擬感染組為對照

2、組。用倒置相差顯微鏡觀察兩組細胞形態(tài)改變至感染后7天。于感染后12h(hour)、24h、48h、72h和96h收獲細胞，提取總的RNA，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測Cdc6 mRNA的表達水平；用免疫細胞化學(xué)法檢測兩組細胞核內(nèi)HCMV Cdt1蛋白。 結(jié)果 1.模擬感染組未見細胞形態(tài)學(xué)改變，感染組感染后36h HEL細胞有形態(tài)學(xué)的改變即可見局部HEL細胞變圓、胞體變大、膨脹，7天時形態(tài)學(xué)的改變

3、更加明顯，所有細胞均發(fā)生病變。 2.12h、24h、48h、72h和96h兩組HEL細胞Cdc6 mRNA表達水平均有顯著性差異(P<0.05)，12h、24h和48h時感染組較模擬感染組明顯增加，72h和96h時模擬感染組較感染組明顯升高。感染組在感染后12h時Cdc6 mRNA表達水平最高，后逐漸下降，至72h時達最低水平，96h時又稍有回升；模擬感染組在感染12h時Cdc6mRNA表達水平最高，后逐漸下降，至48h時達最低

4、水平，72h時后開始回升，96h時繼續(xù)回升。 3.12h、24h、和96h兩組HEL細胞Cdt1蛋白水平均有顯著性差異(P<0.05)，而48h、72h兩組HEL細胞Cdt1蛋白水平無明顯差異(P>0.05)。12h和96h時感染組較模擬感染組明顯降低，24h感染組較模擬感染組明顯升高。模擬感染組在感染后12h時Cdt1蛋白表達水平最高，后逐漸下降，至24h時達最低水平，96h又稍有回升；感染組在感染后12h Cdt1蛋白表達