Cdt1和Geminin在白血病細(xì)胞中的表達(dá)及細(xì)胞周期各時(shí)相分布.pdf

1、第一部分Cdt1和Geminin在Jurkat細(xì)胞中的表達(dá) 目的:為探討細(xì)胞復(fù)制允許因子Cdt1和復(fù)制抑制因子Geminin在白血病細(xì)胞中的表達(dá)。為白血病的發(fā)病機(jī)制、診斷治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。 方法:培養(yǎng)白血病細(xì)胞系Jurkat細(xì)胞，以處于對(duì)數(shù)生長期的Jurkat細(xì)胞作實(shí)驗(yàn)組；以正常人外周血淋巴細(xì)胞作對(duì)照組。利用RT-PCR方法檢測細(xì)胞中Cdt1和Geminin mRNA的表達(dá)，進(jìn)行半定量分析；利用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞熒光

2、強(qiáng)度進(jìn)行定量分析，以檢測細(xì)胞中的Cdt1和Geminin蛋白的表達(dá)。 結(jié)果: ①處于對(duì)數(shù)生長期的Jurkat細(xì)胞Cdt1 mRNA及蛋白表達(dá)顯著高于對(duì)照組。 ②處于對(duì)數(shù)生長期的Jurkat細(xì)胞Geminin mRNA及蛋白的表達(dá)顯著高于對(duì)照組。 結(jié)論: ①人T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞系Jurkat細(xì)胞，Cdt1的表達(dá)水平顯著增高，可能與白血病細(xì)胞惡性增殖有關(guān)。 ②人T淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞系Ju

3、rkat細(xì)胞，Geminin的表達(dá)水平顯著增高，可能參與了白血病細(xì)胞惡性增殖。 第二部分Cdt1和Geminin在K562細(xì)胞周期各時(shí)相中的表達(dá) 目的:為探討細(xì)胞復(fù)制允許因子Cdt1和復(fù)制抑制因子Geminin在白血病細(xì)胞細(xì)胞周期各時(shí)相中的表達(dá)。 方法:培養(yǎng)白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞，使用胸苷將細(xì)胞同步化。利用流式細(xì)胞儀檢測K562細(xì)胞同步率(用PI染色)。同時(shí)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期各時(shí)相細(xì)胞中的Cdt1和Gem

4、inin蛋白的表達(dá)，對(duì)細(xì)胞熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量分析。 結(jié)果: ①K562細(xì)胞被胸苷阻斷24h后，細(xì)胞蓄積在G1/S轉(zhuǎn)換期，釋放4h，細(xì)胞全部進(jìn)入S期，釋放12h細(xì)胞絕大部分進(jìn)入G2/M期，釋放24h，細(xì)胞重新恢復(fù)到對(duì)數(shù)生長期。 ②Cdt1和Geminin蛋白在.K562細(xì)胞周期各個(gè)時(shí)相均有表達(dá)。 ③各時(shí)相Cdt1和Geminin在蛋白水平表達(dá)有顯著差異在G1/S轉(zhuǎn)換期最低，在G2/M轉(zhuǎn)換期最高。 結(jié)論