細(xì)胞分化在細(xì)胞周期進(jìn)程中的時(shí)相性研究.pdf

1、第一部分：全反式維甲酸誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化的細(xì)胞周期時(shí)相性 背景和目的：細(xì)胞分化是細(xì)胞生物學(xué)研究的核心問題之一，研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)細(xì)胞受細(xì)胞外生長信號刺激后，細(xì)胞周期機(jī)制驅(qū)動著細(xì)胞的增殖，聯(lián)系著細(xì)胞的凋亡，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)其調(diào)控著細(xì)胞的分化。但細(xì)胞周期機(jī)制如何調(diào)控細(xì)胞分化尚不明確。在本部分實(shí)驗(yàn)中我們用全反式維甲酸(alltransretinoidacid，ATRA)誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化，研究此分化模型中細(xì)胞周期的變化以及細(xì)胞分化在細(xì)胞周期中

2、的時(shí)相性規(guī)律。 方法：HL-60細(xì)胞經(jīng)分化誘導(dǎo)劑ATRA(終濃度為1μmol/L)誘導(dǎo)不同時(shí)間點(diǎn)后，通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面分化標(biāo)志物CD11b的表達(dá)以及分選后共聚焦顯微技術(shù)來證實(shí)細(xì)胞分化模型構(gòu)建成功；用單參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)DNA含量來分析分化細(xì)胞的細(xì)胞周期分布；創(chuàng)新應(yīng)用CD11b/DNA雙參數(shù)流式細(xì)胞數(shù)術(shù)同時(shí)檢測分化細(xì)胞表面抗原CD11b的表達(dá)及分化細(xì)胞核DNA含量，觀察分化細(xì)胞在細(xì)胞周期中的時(shí)相性表達(dá)。 結(jié)果

3、：HL-60細(xì)胞經(jīng)ATRA誘導(dǎo)后，細(xì)胞表面分化抗原CD11b表達(dá)明顯升高，誘導(dǎo)72小時(shí)陽性率達(dá)到16.68％(對照組細(xì)胞陽性率為1.65％)，分選CD11b表達(dá)陽性的細(xì)胞用共聚焦顯微鏡觀察，細(xì)胞核形態(tài)向成熟粒細(xì)胞變化。誘導(dǎo)后HL-60細(xì)胞阻滯于G0/G1期，且CD11b表達(dá)陽性細(xì)胞主要位于G0/G1期。 結(jié)論：ATRA能誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化，分化細(xì)胞主位于細(xì)胞周期進(jìn)程中的G0/G1期。 第二部分：阿非迪霉素誘導(dǎo)HL-6

4、0細(xì)胞分化的細(xì)胞周期時(shí)相性 目的：用阿非迪霉素誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞來構(gòu)建細(xì)胞分化模型，研究細(xì)胞細(xì)胞分化在細(xì)胞周期進(jìn)程中的時(shí)相性表達(dá)。 方法：HL-60細(xì)胞經(jīng)分化誘導(dǎo)劑阿非迪霉素(終濃度為1μg/ml)誘導(dǎo)不同時(shí)間點(diǎn)后，通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面分化標(biāo)志物CD11b的表達(dá)以及分選后共聚焦顯微技術(shù)來證實(shí)細(xì)胞分化模型構(gòu)建成功；用單參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)DNA含量來分析分化細(xì)胞的細(xì)胞周期分布；應(yīng)用CD11b/DNA雙參數(shù)流式細(xì)胞

5、數(shù)術(shù)同時(shí)檢測分化細(xì)胞表面抗原CD11b的表達(dá)及分化細(xì)胞核DNA含量。 結(jié)果：HL-60細(xì)胞經(jīng)阿非迪霉素誘導(dǎo)，12小時(shí)后細(xì)胞表面分化抗原CD11b表達(dá)有所升高，陽性率為9.68％(對照組細(xì)胞陽性率為0.33％)，分選CD11b表達(dá)陽性的細(xì)胞用共聚焦顯微鏡觀察，細(xì)胞核形態(tài)向成熟粒細(xì)胞變化。誘導(dǎo)后HL-60細(xì)胞阻滯于S期，且CD11b表達(dá)陽性細(xì)胞主要位于S期。 結(jié)論：阿非迪霉素能誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化，分化細(xì)胞主要位于細(xì)胞周期

6、進(jìn)程中的S期。 第三部分：六亞甲基二乙酰胺誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞分化的細(xì)胞周期時(shí)相性 目的：六亞甲基二乙酰胺(HMBA)是一種能誘導(dǎo)急性髓系白血病細(xì)胞分化的極性化合物，我們在這部分研究中構(gòu)建HMBA誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞的分化模型來觀察細(xì)胞周期分布的變化以及分化細(xì)胞在細(xì)胞周期中的時(shí)相性規(guī)律。 方法：HL-60細(xì)胞經(jīng)分化誘導(dǎo)劑HMBA(終濃度為10μmol/L)誘導(dǎo)不同時(shí)間點(diǎn)后，通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面分化標(biāo)志物CD11

7、b的表達(dá)以及分選后共聚焦顯微技術(shù)來證實(shí)細(xì)胞分化模型構(gòu)建成功；用單參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)DNA含量來分析分化細(xì)胞的細(xì)胞周期分布；應(yīng)用CD11b/DNA雙參數(shù)流式細(xì)胞數(shù)術(shù)同時(shí)檢測分化細(xì)胞表面抗原CD11b的表達(dá)及分化細(xì)胞核DNA含量，研究細(xì)胞分化在細(xì)胞周期進(jìn)程中的發(fā)生規(guī)律。 結(jié)果：HL-60細(xì)胞經(jīng)HMBA誘導(dǎo)后，細(xì)胞表面分化抗原CD11b表達(dá)明顯升高，誘導(dǎo)24小時(shí)陽性率達(dá)到28.12％(對照組細(xì)胞陽性率為0.60％)，共聚焦顯微鏡