HCMV感染對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞縫隙連接基因及蛋白的影響.pdf

1、人巨細(xì)胞病毒(Human cytomegalovirus，HCMV)屬于β亞科皰疹病毒，在人群中感染非常普遍，一系列的研究顯示HCMV與神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的發(fā)病機(jī)制關(guān)系密切。在腦組織中，細(xì)胞之間傳遞信息主要依靠于細(xì)胞縫隙連接通訊（gap juncion intercelluar communication，GJIC），細(xì)胞縫隙連接通訊是機(jī)體中傳導(dǎo)信號(hào)最直接的通訊方式，另外，神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞之間的GJIC被預(yù)測(cè)在膠質(zhì)瘤侵襲中起到關(guān)鍵性的作用，并

2、且，腦膠質(zhì)瘤的侵潤(rùn)性是臨床中治療的難點(diǎn)?？p隙連接基因及蛋白的表達(dá)和功能異常與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)，此方面的研究在未來將是新的方向和重點(diǎn)。
　　本研究擬探討HCMV感染對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞縫隙連接基因及蛋白的影響，并深入了解縫隙連接蛋白在腫瘤病理機(jī)制中的作用。分別培養(yǎng)并使用HCMV ADl69株（MOI=1）感染原代神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞和U251細(xì)胞，使用相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，觀察結(jié)果顯示原代神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞及U251細(xì)胞經(jīng)HCMV感

3、染后逐漸變大變圓。檢測(cè)HCMV感染原代神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞及U251細(xì)胞后縫隙連接基因GJA8和GJB1的表達(dá)，結(jié)果顯示縫隙連接基因GJA8和GJB1在原代神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞及U251細(xì)胞中均可表達(dá)。Real-time PCR檢測(cè)原代神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞及U251細(xì)胞經(jīng)HCMV感染后縫隙連接基因GJA8和GJB1的表達(dá)，結(jié)果表明原代神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞經(jīng)HCMV感染0h、12h、24h、48h后，GJB1的相對(duì)表達(dá)水平下降（P＜0.05），GJA8在24h后

4、相對(duì)表達(dá)水平下降（P＜0.05），在24h之前無明顯變化（P＞0.05）；U251細(xì)胞經(jīng)HCMV感染0h、12h、24h、48h后，GJA8和GJB1的相對(duì)表達(dá)量均是下降趨勢(shì)（P＜0.05）。再使用Western-Blot檢測(cè)原代神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞及U251細(xì)胞經(jīng)HCMV感染后縫隙連接蛋白Cx50及Cx32的表達(dá)，結(jié)果表明，原代神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞經(jīng)HCMV感染0h、12h、24h、48h后，Cx32的相對(duì)表達(dá)量減少（P＜0.05），Cx50的相

5、對(duì)表達(dá)量在24h之前無明顯變化（P＞0.05），24h后相對(duì)表達(dá)量出現(xiàn)減少趨勢(shì)（P＜0.05）；U251細(xì)胞經(jīng)HCMV感染0h、12h、24h、48h后，Cx50和Cx32的相對(duì)表達(dá)量均是下降趨勢(shì)（P＜0.05）。使用細(xì)胞劃痕法檢測(cè)HCMV感染對(duì)U251細(xì)胞的遷移能力的影響，結(jié)果顯示經(jīng)HCMV感染的U251細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)。以上這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明原代神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞和U251細(xì)胞經(jīng)HCMV感染后，縫隙連接基因及蛋白的表達(dá)量有所差異，此