HCMV感染影響ATF5甲基化參與神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)展的作用機制研究.pdf

1、分類號：R3R3密級：UDC：610610學(xué)校代碼：1106511065博士學(xué)位論文HCMVHCMV感染影響感染影響ATF5ATF5甲基化參與神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)甲基化參與神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)展的作用機制研究展的作用機制研究華曉敏指導(dǎo)教師王斌教授學(xué)科專業(yè)名稱病原生物學(xué)論文提交日期2016年6月2號論文答辯日期2016年5月31號答辯委員會主席張士璀教授青島大學(xué)博士學(xué)位論文8.采用RTPCR及WesternBlot檢測HCMV感染及S腺苷甲硫氨酸處理對A

2、TF5及甲基化相關(guān)基因（TET1、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B）表達的影響；9.CCK8法檢測HCMV及S腺苷甲硫氨酸對細胞增殖的影響。結(jié)果結(jié)果1.共收集35例膠質(zhì)瘤手術(shù)標本以及5例急性腦外傷組織標本作為對照。WHOⅠⅡ級為低級別，高分化，10例；WHOⅢⅣ級為高級別，低分化，25例。RTPCR結(jié)果顯示，膠質(zhì)瘤標本中IE2mRNA的表達量明顯高于對照組織（P0.05)，并且高級別膠質(zhì)瘤組織中IE2mRNA的表達量也高于低級別膠

3、質(zhì)瘤組織（P0.05)，而對照組織中IE2呈現(xiàn)低表達，這表明IE2的表達量與膠質(zhì)瘤分級密切相關(guān)；2.重亞硫酸鹽測序結(jié)果顯示，5例正常腦組織，10例低級別膠質(zhì)瘤及25例高級別膠質(zhì)瘤中ATF5基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化比例分別為87.78%、73.89%、47.70%，甲基化比例逐漸降低，且兩兩相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；3.QuantitativeRTPCR結(jié)果表明，與對照組相比，膠質(zhì)瘤標本中ATF5表達水平升高（P＜0.05

4、)；且HCMV陽性膠質(zhì)瘤組織中ATF5表達水平高于HCMV陰性膠質(zhì)瘤組織及對照組；ATF5表達水平與膠質(zhì)瘤分級及HCMV感染具有相關(guān)性，且膠質(zhì)瘤組織中ATF5基因啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)對該基因的表達有重要意義；4.在與患者的臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)，ATF5啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)與膠質(zhì)瘤分級密切相關(guān)（P＜0.05）；而與腫瘤大小、患者年齡等分析中，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；5.HCMV感染后，顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，星形膠質(zhì)細

5、胞、膠質(zhì)瘤細胞系U87及原代膠質(zhì)瘤細胞均出現(xiàn)典型的細胞病變效應(yīng)，為HCMV容許細胞；6.重亞硫酸鹽測序結(jié)果表明，在星形膠質(zhì)細胞中，病毒感染前，ATF5啟動子區(qū)CpG島甲基化比例為96.30%，感染6h后，甲基化比例為46.30%，與對照組相比，甲基化比例明顯降低（P＜0.05）；在U87及原代膠質(zhì)瘤細胞中，病毒感染72h后，ATF5啟動子區(qū)CpG島甲基化比例明顯降低（P＜0.05）；SAM處理組以及HCMVSAM共同處理組中ATF5啟動

6、子區(qū)CpG島甲基化水平升高；7.RTPCR及WesternBlot結(jié)果顯示，HCMV感染能夠提高膠質(zhì)瘤細胞中ATF5mRNA及蛋白表達水平，SAM處理后，ATF5基因及蛋白表達水平下降；并且HCMV感染星形膠質(zhì)細胞6h及膠質(zhì)瘤細胞72h后，TET1表達水平上升，DNMT1表達水平下降，而DNMT3A、DNMT3B沒有明顯變化。SAM處理組及HCMVSAM共同處理組，TET1表達水平降低，DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的表達水平?jīng)]