p16基因甲基化與人腦膠質(zhì)瘤臨床病理特征關系的研究.pdf

1、腦膠質(zhì)瘤是一種難根治、易復發(fā)的常見腫瘤。近來國外研究證實：p16基因表達下降可能也是誘發(fā)因素之一。 p16基因的功能產(chǎn)物P16蛋白能使細胞增殖受到控制。pl6基因5'CpG島甲基化導致p16基因轉錄抑制而使P16表達下降，這必然削弱其對細胞增殖的控制，從而導致細胞惡性轉化。 本研究采用甲基化特異PCR技術(MSP法冊究腦膠質(zhì)瘤組織p16基因甲基化，并分析其與臨床病理特征的關系；采用RT-PCR技術和半定量測定p16cDN

2、A擴增產(chǎn)物的光密度來測定p16mR3IA的表達；采用免疫組織化學染色來測定p16蛋白的表達，同時測定另外兩個基因P53(突變型P53蛋白)，Ki67蛋白的表達。 56例腦膠質(zhì)瘤組織中有10例(17.9％)呈p16CpG區(qū)甲基化陽性。膠質(zhì)瘤的p16CpG區(qū)甲基化與性別、年齡無關，而與腫瘤級別、浸潤與否有關。有浸潤的腦膠質(zhì)瘤p16CpG區(qū)甲基化明顯高于暫無浸潤者。p16CpG區(qū)甲基化也多發(fā)生于ⅡI級、Ⅳ級(即腫瘤惡性程度高)的病例。

3、 正常組織p16cDNA的PCR產(chǎn)物光密度值較高。未甲基化標本p16cDNA的PCR產(chǎn)物光密度值低于正常組織，甲基化標本p16cDNA的PCR產(chǎn)物光密度值更低。甲基化標本p16cDNA的PCR產(chǎn)物光密度值低于正常組織是因為pl6基因5，CpG島甲基化導致p16基因轉錄抑制。未甲基化標本p16cDNA的PCR產(chǎn)物光密度值低于正常組織是因為缺失和突變以及其他非甲基化機制導致p16基因mRNA水平的下降。 正常組織P16組化染

4、色陽性較高，而未甲基化標本和甲基化標本P16組化染色陽性低于正常組織。40.0％的甲基化標本P16組化染色結果陰性。甲基化標．本p16基因蛋白表達的水平低于正常組織是因為pl6基因5'CpG島甲基化導致基因轉錄抑制，而使其蛋白表達下降。缺失和突變以及其他非甲基化機制也可導致p16基因蛋白表達下降。 突變型P53、Ki67是顯示細胞快速增殖的兩個指標。正常組織突變型P53、Ki67組化染色結果陰性。而未甲基化標本和甲基化標本突變型

5、P53、Ki67組化染色結果高于正常組織。50.0％甲基化標本突變型P53、Ki67染色結果在++一—+++之間。正常組織由于p16基因的功能產(chǎn)物P16蛋白使得細胞增殖受到控制(如前所述)。甲基化標本因為p16基因5'CpG島甲基化導致基因轉錄抑制，而使其蛋白表達下降，其對細胞增殖的控制力下降。細胞增殖失控，突變型P53、Ki67蛋白表達顯著上升。未甲基化標本因為缺失和突變以及其他非甲基化機制導致p16基因改變，其蛋白表達下降。同樣失去

6、了對細胞增殖的控制，突變型P53、Ki67蛋白表達上升，細胞大量增殖。 本研究顯示：腦膠質(zhì)瘤的惡性程度越高，p16CpG區(qū)甲基化發(fā)生率升高，p16基因轉錄受到抑制，P16蛋白表達降低，突變型P53蛋白、Ki67蛋白表達升高。這說明pl6基因5'CpG島甲基化導致p16基因轉錄抑制而使p16表達下降，這必然削弱其對細胞增殖的控制，從而導致細胞增殖活性惡性升高，最終腫瘤形成。 p16基因甲基化的檢測可作為腦膠質(zhì)瘤診斷的輔助手